[發(fā)明專利]以羊乳種子為外植體建立羊乳再生體系用培養(yǎng)基及建立羊乳再生體系的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210143701.5
• 申請日: 2022-02-17
• 公開（公告）號: CN114451304B
• 公開（公告）日: 2022-11-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李冬玲;顧永華;汪瓊
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇省中國科學(xué)院植物研究所
• 主分類號: C12N5/04
• 分類號: C12N5/04;A01H4/00
• 代理公司: 北京高沃律師事務(wù)所 11569
• 代理人: 劉奇

本發(fā)明涉及以羊乳種子為外植體建立羊乳再生體系用培養(yǎng)基及建立羊乳再生體系的方法，屬于組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明提供了一組以羊乳種子為外植體建立羊乳再生體系用培養(yǎng)基，包括：愈傷組織誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基、愈傷組織分化培養(yǎng)基、壯芽培養(yǎng)基和壯苗生根培養(yǎng)基。本發(fā)明所述培養(yǎng)基能夠?qū)崿F(xiàn)羊乳種苗的周年生產(chǎn)，克服羊乳種子繁殖困難的問題，繁殖系數(shù)高、繁殖速度快為實現(xiàn)對羊乳的分子生物學(xué)操作奠定了技術(shù)基礎(chǔ)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及以羊乳種子為外植體建立羊乳再生體系用培養(yǎng)基及建立羊乳再生體系的方法。

背景技術(shù)

羊乳(Codonopsis lanceolata(Sieb.etZucc.)Trautv.)為桔梗科黨參屬多年生草本植物，又名山胡蘿卜、輪葉黨參、羊奶參、四葉參等。植株全體光滑無毛或莖葉偶疏生柔毛。莖纏繞，葉細(xì)小在主莖上的互生，披針形或菱狀狹卵形，葉片菱狀卵形、狹卵形或橢圓形，花單生或?qū)ι谛≈敹耍换ㄝ噘N生至子房中部，花冠闊鐘狀，黃綠色或乳白色內(nèi)有紫色斑；花盤肉質(zhì)，深綠色；花絲鉆狀，子房下位。蒴果，果期7-8月。主要分布于我國東北、華北、華東和中南各省區(qū)。俄羅斯遠東地區(qū)、朝鮮、日本也有分布。以根入藥，味甘、辛、平，具有滋補強壯、補虛通乳、排膿解毒、祛痰的功效。用于血虛氣弱、肺癰咯血、乳汁少、各種癰疽腫毒、帶下病等病癥的治療。

藥用植物羊乳種子卵形，有翼，但較細(xì)小，種子體積小，千粒重僅1.4g。目前，羊乳的繁殖以種子繁殖為主。王岳峰等(2011)¹、耿艷秋等(2011)²的研究表明，二年生輪葉黨參植株比一年生植株所結(jié)種子的發(fā)芽率高19％；但種子壽命較短，且對貯存條件較為敏感，貯存1年后的種子發(fā)芽率只有10％；冬季自然溫度條件(-30～10℃)下貯存，發(fā)芽率為51％，室內(nèi)(10～20℃)貯存，其發(fā)芽率只有8％。莊旭生和奚廣生(2011)的研究表明，赤霉素浸種加上變溫處理可以提高羊乳種子的發(fā)芽率，最高也僅能達到49.33％³。因此，推測低溫春化可能是羊乳種子萌發(fā)不可缺少的外界條件；且只有完成低溫春化后，赤霉素處理才能一定程度提高種子的發(fā)芽率；除此之外，羊乳種胚在形態(tài)和生理上還存在后熟現(xiàn)象，致使其發(fā)芽周期長。盡管可以通過秋季播種來解決這一問題，但是幼苗越冬期間的管理成本較高。總之，種子發(fā)芽率較低，發(fā)芽速度慢，加上種子細(xì)小，造成羊乳繁殖、栽培的成本較高，不利于其大面積的栽培和推廣應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供以羊乳種子為外植體建立羊乳再生體系用培養(yǎng)基及建立羊乳再生體系的方法。本發(fā)明所述培養(yǎng)基能夠?qū)崿F(xiàn)羊乳種苗的周年生產(chǎn)，克服羊乳種子繁殖困難的問題，繁殖系數(shù)高、繁殖速度快為實現(xiàn)對羊乳的分子生物學(xué)操作奠定了技術(shù)基礎(chǔ)。

本發(fā)明提供了一組以羊乳種子為外植體建立羊乳再生體系用培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基包括：愈傷組織誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基、愈傷組織分化培養(yǎng)基、壯芽培養(yǎng)基和壯苗生根培養(yǎng)基；

所述愈傷組織誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基以MS或B5為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，包括蔗糖30g/L、瓊脂7.0～7.5g/L、KT 0.5～1.5mg/L、NAA 0.1～0.5mg/L和碳納米管0.5～1.5mg/L；

所述愈傷組織分化培養(yǎng)基以MS或B5為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，包括蔗糖30g/L、瓊脂7.0～7.5g/L、6-BA 0.5～1.0mg/L、NAA 0.2～0.6mg/L和碳納米管0.5～1.5mg/L；

所述壯芽培養(yǎng)基以MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，包括蔗糖40g/L、瓊脂7.0～7.5g/L、6-BA 0.3～0.8mg/L、NAA 0.1～0.3mg/L和碳納米管0.5～1.5mg/L；

所述壯苗生根培養(yǎng)基以MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，包括蔗糖40g/L、瓊脂7.0～7.5g/L、IBA0.5～1.5mg/L和碳納米管2.0～4.0mg/L。

本發(fā)明還提供了一種基于上述技術(shù)方案所述培養(yǎng)基的以羊乳種子為外植體建立羊乳再生體系的方法，包括以下步驟：