[發明專利]以羊乳種子為外植體建立羊乳再生體系用培養基及建立羊乳再生體系的方法

有效

• 申請號: 202210143701.5
• 申請日: 2022-02-17
• 公開（公告）號: CN114451304B
• 公開（公告）日: 2022-11-08
• 發明（設計）人: 李冬玲;顧永華;汪瓊
• 申請（專利權）人: 江蘇省中國科學院植物研究所
• 主分類號: C12N5/04
• 分類號: C12N5/04;A01H4/00
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 劉奇

1.一種以羊乳種子為外植體建立羊乳再生體系的方法，所述方法基于一組培養基，所述培養基為：愈傷組織誘導增殖培養基、愈傷組織分化培養基、壯芽培養基和壯苗生根培養基；

所述愈傷組織誘導增殖培養基以MS或B5為基礎培養基，添加蔗糖30g/L、瓊脂7.0～7.5g/L、KT 0.5～1.5mg/L、NAA 0.1～0.5mg/L和多壁碳納米管0.5～1.5mg/L；

所述愈傷組織分化培養基以MS或B5為基礎培養基，添加蔗糖30g/L、瓊脂7.0～7.5g/L、6-BA 0.5～1.0mg/L、NAA 0.2～0.6mg/L和多壁碳納米管0.5～1.5mg/L；

所述壯芽培養基以MS為基礎培養基，添加蔗糖40g/L、瓊脂7.0～7.5g/L、6-BA 0.3～0.8mg/L、NAA 0.1～0.3mg/L和多壁碳納米管0.5～1.5mg/L；

所述壯苗生根培養基以MS為基礎培養基，添加蔗糖40g/L、瓊脂7.0～7.5g/L、IBA 0.5～1.5mg/L和多壁碳納米管2.0～4.0mg/L；

所述方法包括以下步驟：

1)將消毒后的種子接種在愈傷組織誘導增殖培養基上進行愈傷誘導培養，得到愈傷組織，將愈傷組織在新的愈傷組織誘導增殖培養基上進行增殖培養，得到增殖后的愈傷組織；

2)將步驟1)得到的增殖后的愈傷組織切塊，接種到愈傷組織分化培養基上進行分化培養，得到叢生小苗；

3)將步驟2)得到的叢生小苗轉接到壯芽培養基上進行壯芽培養，分切，得到單株試管苗；

4)將步驟3)得到的單株試管苗轉接到壯苗生根培養基上進行壯苗生根共培養，得到試管苗；

5)將步驟4)得到的試管苗進行煉苗和移栽，得到再生羊乳。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述消毒前，還包括對種子進行洗滌，所述洗滌包括震蕩洗滌20～30min，再用流水沖洗1.5～2h。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述消毒包括使用乙醇水溶液和氯化汞水溶液進行消毒。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述愈傷誘導培養、增殖培養、分化培養、壯芽培養和壯苗生根培養的過程中，溫度為25±1℃。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述愈傷誘導培養、增殖培養、分化培養、壯芽培養和壯苗生根培養的過程中，光照強度為100～300μmol·m^-2·s^-1。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述愈傷誘導培養、增殖培養、分化培養、壯芽培養和壯苗生根培養的過程中，光照時間為16h/d。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟3)所述壯芽培養后，單株試管苗的高度為4～6cm、葉片4～6片以上。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟4)所述壯苗生根培養后，試管苗的高度為6～7cm、葉片為6片以上、根數目為3～5條和根長度為0.8～1.2cm。

9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟5)所述移栽的基質包括泥炭土、珍珠巖和田園土，所述泥炭土、珍珠巖和田園土的體積比為(1.0～2.0):(0.5～1.0):(0.5～1.0)。