[發(fā)明專利]一種應(yīng)用氣溶膠早期預(yù)警糧谷中真菌毒素污染的方法及應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210143622.4
• 申請日: 2022-02-16
• 公開（公告）號: CN114525358A
• 公開（公告）日: 2022-05-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 楊愛馥;鄭秋月;曹際娟;黃大亮;梁冰
• 申請（專利權(quán)）人: 大連民族大學(xué);大連海關(guān)技術(shù)中心
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/686;C12Q1/6869;C12R1/67;C12R1/66;C12R1/77
• 代理公司: 大連格智知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 21238
• 代理人: 劉曉琴

1.一種應(yīng)用氣溶膠早期預(yù)警糧谷中真菌毒素污染的方法，其特征在于，包括如下步驟：在驗證了糧食儲存環(huán)境的氣溶膠中真菌組分與同一環(huán)境下的已污染真菌毒素的糧食參考樣品中的真菌組分具有正相關(guān)性基礎(chǔ)上；通過采集糧食環(huán)境中的微生物氣溶膠，根據(jù)氣溶膠中實時熒光PCR方法檢測結(jié)果，判斷糧谷及其制品中真菌污染情況。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于：所述利用實時熒光PCR技術(shù)檢測氣溶膠中真菌的方法，還包括如下步驟：所述采集糧食環(huán)境中的生物氣溶膠是通過液體撞擊式空氣微生物采樣器采集；將收集到的氣溶膠采集液置于29-32℃培養(yǎng)過夜，用0.45μm的無菌濾膜過濾，將微生物富集到無菌濾膜上；采用CTAB法或真菌DNA提取試劑盒提取濾膜上真菌總DNA作為檢測模板。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于：所述氣溶膠中產(chǎn)毒素真菌主要包括黃曲霉、寄生曲霉、黃色鐮孢菌和串珠鐮孢菌。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于：所述實時熒光PCR方法所用到的真菌毒素生物合成關(guān)鍵調(diào)控基因及其核苷酸序列如下：產(chǎn)黃曲霉毒素真菌的aflR基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.25、omt-1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.26、ver-1基因的核苷酸序列如SEQID NO.27；產(chǎn)伏馬毒素真菌的FUM1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.28、FUM5基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.29；產(chǎn)玉米赤霉烯酮毒素真菌的PKS4基因的核苷酸序列如SEQ IDNO.30、PKS13基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.31；產(chǎn)赭曲霉毒素真菌的otanpsPN基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.32。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于：所述熒光PCR方法采用的引物和熒光探針如SEQ ID NO.1-24所述。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于：所述實時熒光PCR反應(yīng)體系，每25μL反應(yīng)體系中包含：2×PremixExTaq^TM12.5μL，10μmol/L正向引物0.5μL，10μmol/L的反向引物0.5μL，5μmol/L熒光探針1μL，RoxPeference DyeⅡ0.5μL，100μg/mL模板DNA 2μL，滅菌雙蒸水8μL。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于：實時熒光PCR反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性10s，1個循環(huán)；95℃變性5s，60℃退火/延伸34s；40個循環(huán)，熒光閾值為設(shè)備默認(rèn)值。

8.如權(quán)利要求1所述方法在檢測糧谷及制品中產(chǎn)毒素真菌污染的應(yīng)用。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于：包括對糧谷及制品中產(chǎn)毒素真菌污染的早期預(yù)警，預(yù)防控制糧谷及制品中產(chǎn)毒素真菌及其毒素的危害。

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于：包括應(yīng)用于糧食儲存或者裝卸、出倉、入倉、中轉(zhuǎn)、加工場所。