[發明專利]一種基于體細胞胚途徑的獨蒜蘭組織快繁方法

有效

• 申請號: 202210136194.2
• 申請日: 2022-02-15
• 公開（公告）號: CN114431145B
• 公開（公告）日: 2023-01-03
• 發明（設計）人: 柴偉國;裘劼人;童建新;周歷萍
• 申請（專利權）人: 杭州市農業科學研究院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 杭州中港知識產權代理有限公司 33353
• 代理人: 張曉紅

1. 一種基于體細胞胚途徑的獨蒜蘭組織快繁方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）外植體的選擇與滅菌

外植體的選擇：選擇健康的3~4年的植株，在獨蒜蘭開花期間進行人工輔助授粉，提高坐果率，經過1~3個月精心培育，在果莢成熟轉黃前采摘，要求果莢外皮青綠色，無病斑無傷疤，果莢內壁組織幼嫩、外皮組織未完全纖維化；

外植體的滅菌：果莢用洗潔精水浸泡10~15min，用毛刷刷凈種殼表面，并用自來水沖洗15~30min；在超凈工作臺上用75%酒精表面滅菌處理20~40 s，0.1%升汞浸泡滅菌5~15min，用無菌水沖洗5~6次，無菌濾紙吸干果莢表面水分；

（2）誘導培養

誘導培養基選用B5，添加0.1~1.0mg/L NAA，在超凈工作臺上用手術刀和鑷子將滅菌好的果莢兩端切除，縱向剖開果莢，將果莢內的未成熟的種子剔除，把果莢內壁組織剝離接種到誘導培養基上，溫度為24℃~26℃，放到培養室暗培養30~60天后，待長出愈傷組織后轉入光照培養；光照培養的光照強度為1800~2500lx，光照時間為10~14小時/天，直至產生綠色叢生芽；

（3）增殖培養

將綠色芽叢切割分離進行增殖培養，平均30~60天增殖一代，每代增殖5~10倍；增殖培養基采用MS，添加0.2~0.8 mg/L 6-BA和 0.1~0.6 mg/L KT，設置溫度為24℃~26℃，光照強度為1800~2500lx,光照時間為10~14小時/天；

（4）生根培養

經過90~150天培養，綠色叢生芽在形態上進一步分化形成原球莖叢，將原球莖叢在無菌操作臺上分割，選取直徑超過0.5cm的原球莖，接種至生根培養基；生根培養基選用1/2MS+ 0.2~0.8mg/L 6-BA +0.1~0.6mg/L KT；培養溫度為24℃~26℃，光照強度為1800~2500lx，光照時間為10~14小時/天，生根時間為30~40天；

（5）馴化培養：將生根良好的健壯瓶苗取出組培室，打開瓶蓋放置3~5天，將苗倒出洗凈培養基，用稀釋到800~1000倍的多菌靈浸泡獨蒜蘭瓶苗根部5~10min，洗凈陰干水分，將其移栽到基質中進行馴化栽培。

2. 如權利要求1所述的一種基于體細胞胚途徑的獨蒜蘭組織快繁方法，其特征在于（1）中：選取1~3個月齡的果莢，果莢用洗潔精水浸泡時間為12~13min，用自來水沖洗20~25min；用75%酒精表面滅菌處理25~35 s，0.1%升汞浸泡滅菌8~12min。

3.如權利要求1所述的一種基于體細胞胚途徑的獨蒜蘭組織快繁方法，其特征在于步驟（2）誘導培養中：NAA的濃度為0.2~0.5mg/L，光照強度為2000~2200lx，光照時間為12~13小時/天。

4.如權利要求1所述的一種基于體細胞胚途徑的獨蒜蘭組織快繁方法，其特征在于步驟（2）誘導培養中：NAA的濃度為0.4~0.5mg/L。

5. 如權利要求1所述的一種基于體細胞胚途徑的獨蒜蘭組織快繁方法，其特征在于步驟（3）增殖培養中：增殖培養基采用MS，添加0.3~0.6 mg/L 6-BA和 0.2~0.3 mg/L KT；設置溫度為25℃，光照強度為2000~2200lx，光照時間為11~12小時/天。

6. 如權利要求1所述的一種基于體細胞胚途徑的獨蒜蘭組織快繁方法，其特征在于步驟（4）生根培養中：生根培養選用1/2MS+ 0.3~0.5mg/L 6-BA +0.2~0.4mg/L KT；培養溫度為25℃，光照強度為2000~2200lx，光照時間為12~13小時/天。

7.如權利要求1所述的一種基于體細胞胚途徑的獨蒜蘭組織快繁方法，其特征在于步驟（4）生根培養中：當原球莖叢的原球莖直徑超過0.5cm時，在無菌操作臺上分割成1~2個原球莖為1叢，并接種至生根培養基進行生根，生根時間30~40天。

8.如權利要求1所述的一種基于體細胞胚途徑的獨蒜蘭組織快繁方法，其特征在于：內壁組織誘導培養前期溫度為24℃~26℃，放到培養室暗培養30~60天后，待長出愈傷組織后轉入光照培養；以后光照誘導培養、增殖培養和生根培養的溫度為24℃~26℃，光照強度為2000~2500lx，光照時間為10~14小時/天。