[發明專利]一種熒光免疫層析試紙條及其制備方法

在審

• 申請號: 202210134748.5
• 申請日: 2022-02-14
• 公開（公告）號: CN114563565A
• 公開（公告）日: 2022-05-31
• 發明（設計）人: 王恒強;陳廷友;丁芝;張秀杰;張曉剛
• 申請（專利權）人: 北京英諾特生物技術股份有限公司
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/569;G01N33/58;G01N21/64
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 黃爽

本發明涉及免疫檢測技術領域，尤其涉及一種熒光免疫層析試紙條及其制備方法。所述制備方法包括：制備抗原?熒光微球復合物；所述制備抗原?熒光微球復合物包括：采用HEPES溶液稀釋熒光微球，經過活化處理、離心后采用復溶液復溶沉淀；加入新冠病毒RBD抗原后經過封閉、離心后采用所述復溶液復溶沉淀；所述新冠病毒RBD抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本發明提供的抗原?熒光微球復合物的制備方法可以有效提高熒光微球偶聯物在結合物墊上的結合水平，這在基于熒光免疫層析法對新冠病毒中和抗體進行檢測的領域具有重要意義。

技術領域

本發明涉及免疫檢測技術領域，尤其涉及一種熒光免疫層析試紙條及其制備方法。

背景技術

中和抗體是由病毒最外層的包膜或衣殼抗原刺激機體產生的一類能與病毒結合并使之喪失感染力的抗體。病毒侵入人體后，體內漿細胞會產生病毒特異性抗體，其中只有一部分是中和抗體。

中和抗體作用機制一般包括改變病毒表面構型；與吸附有關的病毒表位結合，阻止病毒吸附，使病毒不能侵入細胞進行增值；與病毒形成免疫復合物，易被巨噬細胞吞噬清除；有包膜病毒的表面抗原與中和抗體結合后，激活補體，可導致病毒的溶解。

中和抗體檢測的實驗室金標準是感染抑制實驗，主要包括利用活病毒進行的蝕斑減少中和試驗(plaque reduction neutralization test,PRNT)和通過檢測細胞病變(cytopathic effect,CPE)量來進行分析的微量細胞中和試驗。這兩種方法均使用定量的活病毒與不同稀釋度的等量血清混合后，接種預先準備好的單層細胞，通過不同的指標評價細胞的病變程度評價中和抗體效價。

傳統的中和抗體檢測因耗時長、檢測條件要求較高、生物安全風險較高等因素，難以有效滿足快速、大范圍檢測的需求。因此，迫切需要一種簡單快速的替代方法，用于大規模人群保護性抗體的評估。

發明內容

為了解決現有技術存在的問題，本發明提供一種量子點熒光免疫層析法試紙條及其應用，通過特定的量子點微球復溶液，可以有效提高抗原-量子點和結合物墊的結合程度，提高檢測穩定性。

第一方面，本發明提供一種熒光免疫層析試紙條的制備方法，包括：

制備抗原-熒光微球復合物；

所述制備抗原-熒光微球復合物包括：

采用HEPES溶液稀釋熒光微球，經過活化處理、離心后采用復溶液復溶沉淀；

加入新冠病毒RBD抗原后經過封閉、離心后采用所述復溶液復溶沉淀；

所述新冠病毒RBD抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本發明對新冠病毒RBD蛋白進行改造，提升其與抗體結合能力，進而提升試劑靈敏度。

進一步地，所述復溶液為在10～50mM硼酸鹽緩沖液中以重量份計，包括：蔗糖1～5份、BSA 0.5～5份、PC300 0.1～1份、PVP 0.1～0.5份、酪蛋白0.1～0.5份和Triton 0.1～0.5份；所述復溶液的pH為7～9。

本發明提供的量子點微球復溶液在溶解抗原-量子點偶聯物以及抗體-量子點偶聯物后噴涂于結合物墊后，可以有效提高兩種量子點偶聯物在結合物墊上的結合水平。

進一步地，所述制備抗原-微球復合物包括：

采用10～200mM的HEPES溶液以(5～15)：1的體積比溶解熒光微球得到熒光微球溶液；加入0.1～10倍于所述熒光微球溶液體積的活化液處理10～30分鐘，離心后采用1～20倍于所述熒光微球溶液體積的所述復溶液復溶沉淀；

加入新冠病毒RBD抗原，混勻后加入5％～20％的BSA溶液混勻30～720分鐘，離心后用5～100倍于所述熒光微球溶液體積的所述復溶液復溶沉淀。