[發明專利]一種熒光免疫層析試紙條及其制備方法

在審

• 申請號: 202210134748.5
• 申請日: 2022-02-14
• 公開（公告）號: CN114563565A
• 公開（公告）日: 2022-05-31
• 發明（設計）人: 王恒強;陳廷友;丁芝;張秀杰;張曉剛
• 申請（專利權）人: 北京英諾特生物技術股份有限公司
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/569;G01N33/58;G01N21/64
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 黃爽

1.一種熒光免疫層析試紙條的制備方法，其特征在于，包括：

制備抗原-熒光微球復合物；

所述制備抗原-熒光微球復合物包括：

采用HEPES溶液稀釋熒光微球，經過活化處理、離心后采用復溶液復溶沉淀；

加入新冠病毒RBD抗原后經過封閉、離心后采用所述復溶液復溶沉淀；

所述新冠病毒RBD抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述制備抗原-微球復合物包括：

采用10～200mM的HEPES溶液以(5～15)：1的體積比溶解熒光微球得到熒光微球溶液；加入0.1～10倍于所述熒光微球溶液體積的活化液處理10～30分鐘，離心后采用1～20倍于所述熒光微球溶液體積的所述復溶液復溶沉淀；

加入新冠病毒RBD抗原，混勻后加入5％～20％的BSA溶液混勻30～720分鐘，離心后用5～100倍于所述熒光微球溶液體積的所述復溶液復溶沉淀。

3.根據權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，所述新冠病毒RBD抗原和所述熒光微球溶液的含量比為(0.1～5)mg:mL；和/或，所述活化液包括質量比為0.1～10的EDC和NHS，和/或，所述BSA溶液的用量為所述熒光微球溶液的1～10倍。

4.根據權利要求1-3任一項所述的制備方法，其特征在于，還包括：

制備雞IgY抗體-熒光微球復合物，樣品和結合物一體墊的預處理，制備樣品和結合物一體墊和包被檢測區和質控區。

5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述樣品和結合物一體墊的預處理包括：

采用處理液以搟涂的形式處理所述樣品和結合物一體墊；所述處理液以重量份計包括硼酸0.001～50份、四硼酸鈉0.001～50份、紅細胞膜單抗0.001～0.2份、BSA 0.001～50份、蔗糖50～500份、吐溫5～10份和Proclin300 0.001～50份。

6.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述制備樣品和結合物一體墊包括：

以1～10μL/cm將抗原-熒光微球復合物以及雞IgY抗體-熒光微球復合物置于樣品和結合物一體墊上，后在30～50℃，相對濕度≤30％條件下，干燥0.5～12小時；和/或，

所述包被檢測區和質控區包括:

將檢測區溶液和質控區溶液分別以0.5～2.0μL/cm置于硝酸纖維素膜的檢測區和質控區，后在30～50℃，相對濕度≤30％條件下，干燥0.5～4小時；

以重量份計，所述檢測區溶液包括：

鼠抗人IgG抗體0.005～0.025份、磷酸氫二鈉1～50份、0.001～10份、1～50份海藻糖；

所述質控區溶液包括：羊抗雞IgY抗體和三羥甲基氨基甲烷；

所述羊抗雞IgY抗體的濃度為0.5～2.5mg/mL，所述三羥甲基氨基甲烷的質量體積百分含量為0.1％～5％。

7.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述熒光微球包括量子點熒光微球、綠色熒光微球、紅色熒光微球、藍色熒光微球、時間分辨熒光微球或磁性熒光微球中的一種或多種。

8.一種熒光免疫層析試紙條，其特征在于，由權利要求1-7任一項所述方法制備得到的。

9.一種試劑盒，其特征在于，包括權利要求8所述的熒光免疫層析試紙條。

10.一種新冠病毒RBD蛋白，其特征在于，所述新冠病毒RBD蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示。