[發明專利]一種高響應度生物體反轉錄DNA合成酶活性的分析方法在審
| 申請號： | 202210132169.7 | 申請日： | 2022-02-14 |
| 公開（公告）號： | CN115521970A | 公開（公告）日： | 2022-12-27 |
| 發明（設計）人： | 朱灝 | 申請（專利權）人： | 華夏源細胞工程集團股份有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/48 | 分類號： | C12Q1/48;C12Q1/686;C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 201100 上海市閔行*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 響應 生物體 轉錄 dna 合成 活性 分析 方法 | ||
1.一種高響應度生物體反轉錄DNA合成酶活性的分析方法，其特征在于，具體步驟包括：
S1.裂解待測細胞，得到樣本；
S2.反轉錄樣本，得到待測產物；
S3.反轉錄陽性對照物，得到對照產物；
S4.測定待測產物和對照產物的熒光信號；
S5.根據測定結果評估待測細胞的端粒酶活性。
2.根據權利要求1所述的一種高響應度生物體反轉錄DNA合成酶活性的分析方法，其特征在于，所述S1步驟具體為，將待測細胞和裂解液混合，分散，裂解反應，得到樣本。
3.根據權利要求2所述的一種高響應度生物體反轉錄DNA合成酶活性的分析方法，其特征在于，所述裂解的溫度為-10～0℃，裂解時間為15-40min。
4.根據權利要求2所述的一種高響應度生物體反轉錄DNA合成酶活性的分析方法，其特征在于，所述裂解液的原料包括，按照體積份計，0.5-1.5份酶抑制劑，0.1-2份抗氧化劑，160-200份溶劑。
5.根據權利要求1所述的一種高響應度生物體反轉錄DNA合成酶活性的分析方法，其特征在于，所述S2步驟具體為，將樣本加入反應液A中進行反轉錄反應，反轉錄溫度為35-40℃；反轉錄時間為2.6-3.2h。
6.根據權利要求5所述的一種高響應度生物體反轉錄DNA合成酶活性的分析方法，其特征在于，所述樣本和反應液A的體積比為1：35-45。
7.根據權利要求1所述的一種高響應度生物體反轉錄DNA合成酶活性的分析方法，其特征在于，所述S4步驟具體為，分別向待測產物和對照產物中加入反應液B，然后置于PCR儀器中上機檢測熒光信號。
8.根據權利要求7所述的一種高響應度生物體反轉錄DNA合成酶活性的分析方法，其特征在于，所述反應液B的原料包括，按照體積份計，1-4份引物，6-12份預混物，6-9份水。
9.根據權利要求7所述的一種高響應度生物體反轉錄DNA合成酶活性的分析方法，其特征在于，所述上機檢測的程序設置為：
10.一種根據權利要求1-9任一項所述的高響應度生物體反轉錄DNA合成酶活性的分析方法的應用，其特征在于，該方法應用于探究診治癌癥，延緩衰老的新機制。
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