[發明專利]一種大腸埃希氏菌多重耐藥性檢測方法及應用

在審

• 申請號: 202210130099.1
• 申請日: 2022-02-11
• 公開（公告）號: CN114438237A
• 公開（公告）日: 2022-05-06
• 發明（設計）人: 趙芳;趙細應;王晶;白爽
• 申請（專利權）人: 深圳市檢驗檢疫科學研究院;深圳海關食品檢驗檢疫技術中心;中山大學孫逸仙紀念醫院
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/10;C12R1/19
• 代理公司: 深圳中圳知識產權代理事務所(普通合伙) 44768
• 代理人: 廖苑濱

本發明屬于大腸埃希氏菌檢測技術領域，具體涉及一種大腸埃希氏菌多重耐藥性檢測方法及應用。本發明提供本發明提供了一種大腸埃希氏菌多重耐藥性檢測方法，包括以下步驟，S1：提取大腸埃希氏菌；S2：將大腸埃希氏菌采用探針進行標記；S3：在標記后的大腸埃希氏菌中加入藥物進行耐藥性檢測。本發明提供大腸埃希氏菌多重耐藥性檢測方法，方法簡單，并且可以進行多種藥物的耐藥性檢測，適用范圍廣。

技術領域

本發明屬于大腸埃希氏菌檢測技術領域，具體涉及一種大腸埃希氏菌多重耐藥性檢測方法及應用。

背景技術

由食源性微生物引起的食品安全事件一直居于首位，現已成為世界衛生疾病問題之一。大腸埃希氏菌通常被稱為大腸桿菌，是目前最為常見的食源性微生物之一，也是食品衛生以及流行病學領域中重要的研究對象。大腸桿菌會引起人體的腹瀉和敗血病。因此，人們在治療大腸桿菌感染的時候，通過采用抗生素進行治療。

但是抗生素，尤其是廣譜抗生素在治療大腸桿菌感染的時候，會使大腸桿菌產生一定的耐藥性。耐藥性又稱抗藥性。生物對抗生素等藥物產生的耐受和抵抗能力。抗藥性的產生使正常劑量的藥物不再發揮應有的殺菌效果，甚至使藥物完全無效，從而給疾病的治療造成困難，并容易使疾病蔓延。

現有技術中對于食源性微生物中大腸埃希氏菌多重耐藥性并沒有直接有效的檢測方法。

發明內容

因此，本發明要解決的技術問題在于克服現有技術中對于食源性微生物中大腸埃希氏菌多重耐藥性并沒有直接有效檢測方法的缺陷，從而提供一種大腸埃希氏菌多重耐藥性檢測方法及應用。

本發明提供了以下技術方案，

本發明提供了一種大腸埃希氏菌多重耐藥性檢測方法，包括以下步驟，

S1：提取大腸埃希氏菌。

S2：將大腸埃希氏菌采用探針進行標記。

S3：在標記后的大腸埃希氏菌中加入藥物進行耐藥性檢測。

2.根據權利要求1所述的大腸埃希氏菌多重耐藥性檢測方法，其特征在于，在步驟S1之前，還需要制備基因芯片；

和/或，所述基因芯片的制備方法包括以下步驟，

將大腸埃希氏菌病原體DNA抽取后置于芯片中進行雜交、顯色，得到基因芯片。

可選的，所述基因芯片為大腸埃希氏菌DNA芯片；

和/或，所述芯片包括硅片、玻片或尼龍膜中的一種。

可選的，所述探針包括VT1探針、VT2探針、EAE基因探針、Stx1探針、Stx2探針、HlyC探針、HlyA探針、HlyB探針和HlyD探針。

可選的，所述藥物為抗生素；

和/或，所述抗生素包括青霉素、左氧氟沙星、頭孢菌素或硝基咪唑類中的一種或多種。

所述硝基咪唑類藥物包括甲硝唑、替硝唑和奧硝唑。

可選的，所述提取大腸埃希氏菌的方法包括以下步驟，

S11：細菌分離；

S12：提取DNA；

S13：多重PCR擴增。

所述細菌分離的方法根據《食品安全風險監測手冊》，對食品標本中的大腸埃希氏菌進行分離。

可選的，提取DNA的方法，包括以下步驟，

制備菌懸液進行離心，然后取其上清液加入核酸提取液進行混合、水浴離心，得到的上清液為提取后的DNA溶液。

可選的，所述菌懸液為細菌分離后的大腸埃希氏菌。

可選的，進行多重PCR擴增的裝置為多重PCR試劑盒。