[發(fā)明專利]一種Zika病毒的檢測試劑及檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210129433.1
• 申請日: 2022-02-11
• 公開（公告）號: CN114509564A
• 公開（公告）日: 2022-05-17
• 發(fā)明（設計）人: 陳若虹;陳保衛(wèi);欒天罡;劉洪濤
• 申請（專利權）人: 中山大學
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/58;G01N33/543;G01N21/78
• 代理公司: 北京市萬慧達律師事務所 11111
• 代理人: 謝敏楠

本公開屬于分析檢測領域，涉及一種Zika病毒的檢測試劑及檢測方法。本公開的膜基傳感器及檢測方法可以通過肉眼快速、靈敏地測定病毒。目標病毒被固定在膜和探針上的特異性捕獲元件和檢測元件識別和捕獲，從而在膜基傳感器上形成三明治形式。通過比色反應，可觀察到捕獲了探針的傳感器發(fā)生顏色變化，表明目標病毒的存在。本公開的檢測的全過程可在1小時內完成。基于膜上預濃縮和雙重信號放大的共同影響，本公開的傳感器可以實現(xiàn)ng/mL級別的檢測限。由于其高靈敏度和便利性，該技術方案在臨床和環(huán)境應用中快速和現(xiàn)場檢測病毒具有廣闊的前景。

技術領域

本發(fā)明屬于分析檢測領域，涉及一種Zika病毒的檢測試劑及檢測方法。

背景技術

使用包括常規(guī)病毒培養(yǎng)方法、分子檢測技術和免疫測定在內的多種技術來檢測病毒^[3]。目前，普遍采用的病毒檢測方法是基于逆轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)^[4]；而使用這些方法的基本要求是龐大的設備和熟練的技術人員。免疫測定由于其較少的培訓和時間成本，適用于快速原位檢測病毒。側流測定(lateral flow)是一種膜基免疫測定，并具有許多優(yōu)點，例如用戶友好的操作、檢測時間短，并且不需要樣品預處理或儀器^[5]。然而，其靈敏度通常低于基于實驗室的免疫測定或RT-PCR的靈敏度。因此，它實際上不能勝任痕量水平的病毒檢測，尤其是在含有復雜基質的真實樣品中。中國專利申請CN113841050A公開了一種側流分析條帶和使用該條帶的分子診斷方法，采用多層不同材質構建復雜的側流分析條帶，測定目標是病毒的核酸，并用抗體作為識別抗原的元素。本領域公知的是，以檢測核酸為基礎的方法普遍存在有假陽性的情況，該測流法中的LAMP還需要增溫，對溫度有一定的要求；且采用抗體作為識別元素容易與其他抗原引起交叉反應。

因此，迫切需要開發(fā)簡單快速的致病性病毒分析方法。

發(fā)明內容

本公開提供了一種膜基傳感器，包括：修飾的膜和探針；所述修飾的膜上載有生物素、鏈霉親和素和捕獲元件；所述探針包括連接有辣根過氧化酶標記的生物素、鏈霉親和素和檢測元件的金屬納米顆粒。

在一些實施方案中，所述捕獲元件與檢測元件相同或不同；在一些實施方案中，所述捕獲元件與檢測元件各自被生物素或熒光基團修飾；在一些實施方案中，所述熒光基團選自 Alexa Fluor 488。

在一些實施方案中，所述捕獲元件與檢測元件各自選自抗體或適配體中的至少一種；在一些實施方案中，所述捕獲元件與檢測元件各自選自適配體。

在一些實施方案中，所述捕獲元件的適配體序列為：5'-CTA GGT TGC AGG GGACTG CTC GGGATT GCG GAT CAA CCTAG-3'。

在一些實施方案中，所述檢測元件的適配體序列為：5'-GCG TGG CGA TCG GACTTT CGATTC CGATTAACG CCG GAG GGC GGG TCGACAAGC-3'。

常規(guī)免疫測定中常用的抗體相對昂貴，并且它們與非靶向病毒抗原的交叉反應可能嚴重損害基于免疫測定的方法的準確性和可靠性。

在一些實施方案中，所述修飾的膜上帶有或經修飾后帶有以下基團中的至少一種：氨基、羧基、醛基、環(huán)氧基；在一些實施方案中，所述修飾的膜上帶有或經修飾后帶有氨基。

在一些實施方案中，所述修飾的膜選自尼龍、靜電防絲、纖維素紙、玻璃、芯片、鋁箔、不銹鋼薄片中的至少一種。