[發明專利]一種Zika病毒的檢測試劑及檢測方法

在審

• 申請號: 202210129433.1
• 申請日: 2022-02-11
• 公開（公告）號: CN114509564A
• 公開（公告）日: 2022-05-17
• 發明（設計）人: 陳若虹;陳保衛;欒天罡;劉洪濤
• 申請（專利權）人: 中山大學
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/58;G01N33/543;G01N21/78
• 代理公司: 北京市萬慧達律師事務所 11111
• 代理人: 謝敏楠

1.一種膜基傳感器，其特征在于，包括：修飾的膜和探針；所述修飾的膜上載有生物素、鏈霉親和素和捕獲元件；所述探針包括連接有辣根過氧化酶標記的生物素、鏈霉親和素和檢測元件的金屬納米顆粒。

2.如權利要求1所述的膜基傳感器，其特征在于，所述捕獲元件與檢測元件相同或不同；

優選地，所述捕獲元件與檢測元件各自被生物素或熒光基團修飾；

優選地，所述熒光基團選自Alexa Fluor 488；

優選地，所述捕獲元件與檢測元件各自選自抗體或適配體中的至少一種；

優選地，所述捕獲元件與檢測元件各自選自適配體；

優選地，所述捕獲元件的適配體序列為：5'-CTA GGT TGC AGG GGA CTG CTC GGG ATTGCG GAT CAA CCT AG-3'；

優選地，所述檢測元件的適配體序列為：5'-GCG TGG CGA TCG GAC TTT CGA TTC CGATTA ACG CCG GAG GGC GGG TCG ACA AGC-3'。

3.如權利要求1所述的膜基傳感器，其特征在于，所述修飾的膜上帶有或經修飾后帶有以下基團中的至少一種：氨基、羧基、醛基、環氧基；

優選地，所述修飾的膜上帶有或經修飾后帶有氨基；

優選地，所述修飾的膜選自尼龍、靜電防絲、纖維素紙、玻璃、芯片、鋁箔、不銹鋼薄片中的至少一種；

優選地，所述修飾的膜選自尼龍；優選地，所述尼龍選自Biodyne B尼龍。

4.如權利要求1所述的膜基傳感器，其特征在于，所述探針的金屬納米顆粒選自選自金納米顆粒、銀納米顆粒或鉑納米顆粒中的至少一種；

優選地，所述金屬納米顆粒選自金納米顆粒；

優選地，所述金屬納米顆粒的大小為20-50nm；更優選30nm；

優選地，所述探針中含有(1.8-2.5)×10¹¹個金屬納米顆粒；優選地，所述探針中含有2×10¹¹個金屬納米顆粒；

優選地，所述探針中金屬納米顆粒的個數與辣根過氧化酶標記的生物素的量的比例為：(1.8-2.5)×10¹¹顆粒：(0.5-15)μg；優選為2×10¹¹顆粒：(0.5-15)μg；

優選地，所述探針中金屬納米顆粒的個數與辣根過氧化酶標記的生物素的量的比例為：2×10¹¹顆粒：8μg。

5.如權利要求1所述的膜基傳感器，其特征在于，所述修飾的膜上的捕獲元件的量為0.5-5nmol；優選為2-5nmol；進一步優選為4nmol。

6.如權利要求1所述的膜基傳感器的制備方法，其特征在于，所述修飾的膜的制備方法包括對制備好的修飾的膜的封閉劑中孵育的步驟；

優選地，所述封閉劑選自牛血清白蛋白、無脂肪酸的牛血清白蛋白或脫脂奶粉中的至少一種；

優選地，所述封閉劑選自無脂肪酸的牛血清白蛋白；

優選地，所述孵育時間為15-120min；優選地，所述孵育時間為60min。

7.一種病毒的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1.將權利要求1-5任一所述的膜基傳感器的修飾的膜和待測樣品接觸，25℃下反應15-60分鐘；

S2.步驟S1完成后，與權利要求1-5任一所述的膜基傳感器的探針混合，孵育5-30分鐘；

S3.將步驟S2制備的反應后的膜基傳感器進行比色反應。

8.如權利要求7所述的檢測方法，其特征在于，所述步驟S1在25℃下反應30分鐘；

優選地，所述步驟S2中的探針體積為5-50μL；優選地，所述步驟S2中的探針體積為10μL；

優選地，所述步驟S2中的孵育時間為10分鐘；

優選地，所述步驟S3的比色反應為3,3',5,5'-四甲基聯苯胺顯色反應；

優選地，所述步驟S3的比色反應時間為8-15分鐘。