[發(fā)明專利]大腸桿菌的高密度培養(yǎng)及在催化生產(chǎn)槲皮素中的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210129181.2
• 申請日: 2022-02-11
• 公開（公告）號: CN114410563B
• 公開（公告）日: 2023-08-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 周景文;單小玉;余世琴;徐沙;曾偉主;陳堅
• 申請（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N9/26;C12N9/42;C12N15/56;C12N15/70;C12P17/06;C12R1/19
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211
• 代理人: 仇鈺瑩

1.一種能夠利用蘆丁生產(chǎn)槲皮素的重組大腸桿菌，其特征在于，所述重組大腸桿菌表達嗜熱鏈球菌來源的L-鼠李糖苷酶和耐熱β-葡萄糖苷酶；所述L-鼠李糖苷酶DthRha具有如Genbank登錄號WP_012548615.1所示的氨基酸序列；所述β-葡萄糖苷酶Dth3具有如Genbank登錄號ACI19278.1所示的氨基酸序列。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組大腸桿菌，其特征在于，編碼所述DthRha的基因序列如SEQ?ID?NO.1所示，編碼所述Dth3的基因序列如SEQ?ID?NO.2所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的重組大腸桿菌，其特征在于，以pET系列載體表達所述L-鼠李糖苷酶和耐熱β-葡萄糖苷酶。

4.根據(jù)權(quán)利要求1～3任一所述的重組大腸桿菌，其特征在于，以E.coli?BL21(DE3)為宿主。

5.含權(quán)利要求1～4任一所述重組大腸桿菌的細胞催化劑，其特征在于，所述細胞催化劑包括但不限于所述重組大腸桿菌的細胞、細胞培養(yǎng)液或固定化細胞。

6.權(quán)利要求1～4任一所述重組大腸桿菌的高密度發(fā)酵方法，其特征在于，將所述重組大腸桿菌接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中，于35～37℃發(fā)酵，發(fā)酵過程溶氧控制為40％，pH為7.0；并于發(fā)酵12h后降溫至30℃開始補料，補料流速為20mL/h；

所述發(fā)酵培養(yǎng)基包括但不限于TB培養(yǎng)基或高密度發(fā)酵培養(yǎng)基；所述高密度發(fā)酵培養(yǎng)基含有KH₂PO₄?6g/L、K₂HPO₄·3H₂O?16.4g/L、(NH₄)₂SO₄?5g/L、無水檸檬酸1g/L、MgSO₄·7H₂O1g/L、酵母粉10g/L、甘油10-30g/L、麥芽糖糊精10g/L、維生素B1?0.1g/L和微量元素溶液1mL/L；所述微量元素溶液含有：檸檬酸鐵100g/L,ZnCl₃?18g/L,MnSO₄·H₂O?14.64g/L,CuSO₄·5H₂O?0.75g/L,Na₂MoO₄·2H₂O?2g/L,CaCl₂.2H₂O?2g/L,H₃BO₃?3.0g/L,CoCl₂·6H₂O2.5g/L,NiSO₄·6H₂O?2.5g/L和HCl?100mL。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，補料的成分包括：3g/L?MgSO₄·7H₂O、10g/L酵母粉和500g/L甘油。

8.一種生產(chǎn)槲皮素的方法，其特征在于，以蘆丁為底物，以權(quán)利要求1～4任一所述的重組大腸桿菌為細胞催化劑生產(chǎn)槲皮素。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，將所述重組大腸桿菌細胞加入至含終濃度10～40g/L蘆丁的反應(yīng)體系中，于75～85℃反應(yīng)至少4h。

10.權(quán)利要求1～4所述重組大腸桿菌，或權(quán)利要求5所述的細胞催化劑，或權(quán)利要求6～9任一所述方法在生產(chǎn)含槲皮素的食品、藥品或保健品中的應(yīng)用。