[發明專利]基于CRISPR檢測腦卒中相關TYMS基因的試劑盒

在審

• 申請號: 202210128252.7
• 申請日: 2022-02-10
• 公開（公告）號: CN114438192A
• 公開（公告）日: 2022-05-06
• 發明（設計）人: 肖以磊;于福華;孫漢宇;劉岳飛;周杰;邢曉輝;李中辰;程誠;姚杰
• 申請（專利權）人: 江蘇博嘉生物醫學科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11;C12Q1/686
• 代理公司: 武漢智嘉聯合知識產權代理事務所(普通合伙) 42231
• 代理人: 姜婷

1.一種檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑盒包括突變型crDNA或突變型crRNA；

所述突變型crDNA包括：

rs699517突變型crDNA，其序列如SEQ ID NO.1所示；

和/或rs2790突變型crDNA，其序列如SEQ ID NO.2所示；

所述突變型crRNA包括：

rs699517突變型crRNA，其序列如SEQ ID NO.3所示；

和/或rs2790突變型crRNA，其序列如SEQ ID NO.4所示。

2.根據權利要求1所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑盒包括用于特異性擴增TYMS基因上rs699517位點的引物對：rs699517-F，其序列如SEQ ID NO.5所示，rs699517-R，其序列如SEQ ID NO.6所示；和/或用于特異性擴增TYMS基因上rs2790位點的引物對：rs2790-F，其序列如SEQ ID NO.7所示；rs2790-R，其序列如SEQ ID NO.8所示。

3.根據權利要求1所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑盒包括cas12a蛋白。

4.根據權利要求1所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑盒包括熒光探針，所述熒光探針的5’端標記有熒光報告基團，所述熒光探針的3’端標記有熒光猝滅基團。

5.根據權利要求1所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑盒包括DNA酶抑制劑。

6.根據權利要求1所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑盒中包括陰性對照品，所述陰性對照品為野生型crDNA或野生型crRNA：

所述野生型crDNA包括：

rs699517野生型crDNA，其序列如SEQ ID NO.9所示；

和/或rs2790野生型crDNA，其序列如SEQ ID NO.10所示；

所述野生型crRNA包括：

rs699517野生型crRNA，其序列如SEQ ID NO.11所示；

和/或rs2790野生型crRNA，其序列如SEQ ID NO.12所示。

7.如權利要求1所述檢測試劑盒在檢測與腦卒中相關TYMS基因突變中的應用。

8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，所述應用的過程具體為：對待測DNA樣品進行PCR擴增，擴增完成后加入檢測混合液反應，并采集熒光變化；所述檢測混合液含有熒光探針和權利要求1所述突變型crRNA；所述突變型crDNA在T7 RNA聚合酶作用下生成RNA，經回收純化得到對應的crRNA。

9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，所述PCR擴增的程序為：95℃3min進行預變性；95℃10s，60℃20s，循環30次；最后降溫至25℃，反應結束。

10.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，所述檢測混合液共50uL，具體為：250～500nM純化的cas12a蛋白，250～500nM突變型crRNA，1～5μL熒光探針，2μL DNA酶抑制劑，無酶水余量。