[發明專利]用于鑒定炮制輔料鱉血的特異性引物對、試劑盒及應用有效
| 申請號： | 202210127758.6 | 申請日： | 2022-02-11 |
| 公開（公告）號： | CN114672571B | 公開（公告）日： | 2023-07-25 |
| 發明（設計）人： | 陸兔林;趙曉莉;毛春芹;毛靖;許金國;蘇雪蓉;謝穎;婁悅 | 申請（專利權）人： | 南京中醫藥大學 |
| 主分類號： | C12Q1/6888 | 分類號： | C12Q1/6888;C12N15/11;C12Q1/686 |
| 代理公司： | 江蘇致邦律師事務所 32230 | 代理人： | 尹妍;徐蓓 |
| 地址： | 210023 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 用于 鑒定 炮制 輔料 特異性 引物 試劑盒 應用 | ||
1.一種用于鑒定炮制輔料鱉血的特異性引物對，其特征在于，
正向引物核苷酸序列為：CTAGCAACCTAGCCCATGTG；
反向引物核苷酸序列為：GGATCTCCTCCTCCAGAAGG。
2.權利要求1所述特異性引物對在制備用于鑒定炮制輔料鱉血的試劑盒中的應用。
3.一種用于鑒定炮制輔料鱉血的試劑盒，其特征在于，包含權利要求1所述特異性引物對。
4.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，還包括PCR反應的試劑。
5.?權利要求1所述特異性引物對在炮制輔料鱉血鑒定中的應用，包括：提取待鑒定樣品基因組DNA，以提取的基因組DNA為模板，使用所述特異性引物進行PCR擴增，對PCR擴增產物進行電泳檢測，在286?bp處檢測出條帶的樣品鑒定為鱉血，在286?bp處未檢測出條帶的樣品鑒定為其他動物血液。
6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，包括，對PCR擴增產物進行測序，根據測序結果進行基原鑒定。
7.根據權利要求5或6所述的應用，其特征在于，PCR擴增的反應體系如下：
基因組DNA提取物100?ng；
2×Rapid?Taq?Master?Mix?5?μL；
正向引物和反向引物各?10?μM?0.2?μL；
雙蒸水補足至10?μL。
8.?根據權利要求5所述的應用，其特征在于，PCR擴增的擴增程序為：95℃預變性3min，95℃變性15?sec，62℃退火15?sec，72℃延伸15?sec，進行29次擴增循環，72℃徹底延伸3?min。
9.根據權利要求5或6所述的應用，其特征在于，還包括，在利用特異性引物對對待測樣品進行基因水平的鑒定后，基于十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）方法對待測樣品進行蛋白水平的鑒定。
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