[發明專利]一種午餐肉罐頭成品的非洲豬瘟病毒檢測方法

在審

• 申請號: 202210124669.6
• 申請日: 2022-02-10
• 公開（公告）號: CN114480736A
• 公開（公告）日: 2022-05-13
• 發明（設計）人: 王榕莉;張文捷;錢文靜
• 申請（專利權）人: 上海梅林食品有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686
• 代理公司: 上海互順專利代理事務所(普通合伙) 31332
• 代理人: 韋志剛;曹月明

本發明涉及一種午餐肉罐頭成品的非洲豬瘟病毒檢測方法。該檢測方法主要包括將待測物置于熒光PCR儀，進行如下反應：37℃孵育2min；95℃預變性20s；95℃變性10s，58℃延伸20s，共40個循環；設置58℃收集FAM熒光信號；進行結果判定，陽性對照應出現擴增曲線且Ct值35，陰性對照無。樣品的擴增結果若有典型的擴增曲線，Ct值40可判定為陽性。本方法開發了獨特的原料預處理和基因提取流程，之后將提取產物進行常規的PCR反應即可檢測非洲豬瘟病毒。

技術領域

本發明涉及一種午餐肉罐頭成品的非洲豬瘟病毒檢測方法。

背景技術

近幾年非洲豬瘟疫情形勢嚴峻，我公司主要以生豬肉為原料，生產豬肉制品罐頭，如午餐肉、西式火腿等。而國家標準《非洲豬瘟診斷技術GB/T18648-2020》主要針對生豬肉進行診斷和病毒檢測。從我公司的實際出發，如果要針對成品罐頭進行非洲豬瘟病毒檢測，不能直接套用國標的流程。

發明內容

本發明的目的是為解決現有技術的不足，提供了一種午餐肉罐頭成品的非洲豬瘟病毒檢測方法，

(1)取0.1g-0.2g待測午餐肉于離心管，加入生理鹽水，混勻后取上清液，放入96孔板，加入蛋白酶K裂解劑；

(2)混合磁珠懸浮液，經過磁吸混合，進行DNA提取；

(3)加入漂洗液進行漂洗；

(4)用無核酸酶水進行洗脫，得到待測核酸

(5)取待測核酸，放入離心管，加入緩沖液，渦旋混勻3-5次；

(6)渦旋混勻后，取上清液，為待檢DNA；

(7)將引物探針和酶反應液瞬時離心后混合，顛倒混勻5-10次，所得為PCR反應液；

(8)取PCR反應管，加入PCR反應液，將陰性對照、待檢DNA、陽性對照分別加到不同的PCR反應管中；

(9)加樣后瞬時離心，置于熒光PCR儀，進行如下反應：37℃孵育2min；95℃預變性20s；95℃變性10s，58℃延伸20s，共40個循環；設置58℃收集FAM熒光信號；

(10)進行結果判定，陽性對照應出現擴增曲線且Ct值35，陰性對照無。樣品的擴增結果若有典型的擴增曲線，Ct值40可判定為陽性。

所述緩沖液為磷酸鉀、磷酸鋅、磷酸鈉中的一種或幾種。

所述漂洗液70-80wt％的乙醇水溶液。

所述檢測方法檢測前，將罐頭易拉蓋用酒精消毒。

所述檢測方法的取樣步驟如下：

打開罐頭，將內容物倒出后，用切片機切成勻稱的薄片取靠近中間一片，在該片肉上取下約0.1g-0.2g，要注意取下的肉要有代表性，不能取夾花、肥肉或是膠凍。

所述檢測方法的步驟(2)-(4)，采用使用自動核酸提取儀進行自動操作。

所述檢測方法的步驟(6)-(10)，采用成品PCR檢測試劑盒進行檢測。

現有非洲豬瘟病毒檢測方法開發時只考慮到診斷生豬肉，如果用該方法檢測午餐肉罐頭成品，檢測結果會因為罐頭成品中的其他成分，如淀粉、卡拉膠，產生干擾和誤差，并可能出現假陽性。因此本方法開發了獨特的原料預處理和基因提取流程，之后將提取產物進行常規的PCR反應即可檢測非洲豬瘟病毒。

參考以下詳細說明更易于理解本申請的上述以及其他特征、方面和優點。

具體實施方式