[發(fā)明專利]一種午餐肉罐頭成品的非洲豬瘟病毒檢測方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202210124669.6 | 申請日： | 2022-02-10 |
| 公開（公告）號： | CN114480736A | 公開（公告）日： | 2022-05-13 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 王榕莉;張文捷;錢文靜 | 申請（專利權(quán)）人： | 上海梅林食品有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/686 |
| 代理公司： | 上?；ロ槍＠硎聞?wù)所(普通合伙) 31332 | 代理人： | 韋志剛;曹月明 |
| 地址： | 200082 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 午餐肉 罐頭 成品 非洲 豬瘟 病毒 檢測 方法 | ||
1.一種午餐肉罐頭成品的非洲豬瘟病毒檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)取0.1g-0.2g待測午餐肉于離心管，加入生理鹽水，混勻后取上清液，放入96孔板，加入蛋白酶K裂解劑；
(2)混合磁珠懸浮液，經(jīng)過磁吸混合，進行DNA提??；
(3)加入漂洗液進行漂洗；
(4)用無核酸酶水進行洗脫，得到待測核酸
(5)取待測核酸，放入離心管，加入緩沖液，渦旋混勻3-5次；
(6)渦旋混勻后，取上清液，為待檢DNA；
(7)將引物探針和酶反應(yīng)液瞬時離心后混合，顛倒混勻5-10次，所得為PCR反應(yīng)液；
(8)取PCR反應(yīng)管，加入PCR反應(yīng)液，將陰性對照、待檢DNA、陽性對照分別加到不同的PCR反應(yīng)管中；
(9)加樣后瞬時離心，置于熒光PCR儀，進行如下反應(yīng)：37℃孵育2min；95℃預(yù)變性20s；95℃變性10s，58℃延伸20s，共40個循環(huán)；設(shè)置58℃收集FAM熒光信號；
(10)進行結(jié)果判定，陽性對照應(yīng)出現(xiàn)擴增曲線且Ct值35，陰性對照無。樣品的擴增結(jié)果若有典型的擴增曲線，Ct值40可判定為陽性。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種午餐肉罐頭成品的非洲豬瘟病毒檢測方法，其特征在于，所述緩沖液為磷酸鉀、磷酸鋅、磷酸鈉中的一種或幾種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種午餐肉罐頭成品的非洲豬瘟病毒檢測方法，其特征在于，所述漂洗液70-80wt％的乙醇水溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種午餐肉罐頭成品的非洲豬瘟病毒檢測方法，其特征在于，所述檢測方法檢測前，將罐頭易拉蓋用酒精消毒。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種午餐肉罐頭成品的非洲豬瘟病毒檢測方法，其特征在于，所述檢測方法的取樣步驟如下：
打開罐頭，將內(nèi)容物倒出后，用切片機切成勻稱的薄片取靠近中間一片，在該片肉上取下約0.1g-0.2g，要注意取下的肉要有代表性，不能取夾花、肥肉或是膠凍。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種午餐肉罐頭成品的非洲豬瘟病毒檢測方法，其特征在于，所述檢測方法的步驟(2)-(4)，采用使用自動核酸提取儀進行自動操作。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種午餐肉罐頭成品的非洲豬瘟病毒檢測方法，其特征在于，所述檢測方法的步驟(6)-(10)，采用成品PCR檢測試劑盒進行檢測。
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