[發明專利]一種檢測豬圓環病毒II型的CDA引物對、試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 202210124318.5
• 申請日: 2022-02-10
• 公開（公告）號: CN114381554A
• 公開（公告）日: 2022-04-22
• 發明（設計）人: 毛瑞;趙月;蔡挺
• 申請（專利權）人: 國科寧波生命與健康產業研究院;中國科學院大學寧波華美醫院
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 上海碩力知識產權代理事務所(普通合伙) 31251
• 代理人: 王法男

1.一種非疾病診斷目的的檢測豬圓環病毒II型的CDA引物對，其特征在于：所述CDA引物對為PCV2-MF/PCV2-MR，其中，PCV2-MF的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，PCV2-MR的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.一種檢測豬圓環病毒II型的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包括權利要求1所述的CDA引物對。

3.如權利要求2所述的一種檢測豬圓環病毒II型的試劑盒，其特征在于：所述CDA引物對中，引物PCV2-MF與PCV2-MR的濃度均為1～2μM。

4.如權利要求2所述的一種檢測豬圓環病毒II型的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括Bst聚合酶、CDA反應緩沖液、超純水以及顯色劑。

5.如權利要求4所述的一種檢測豬圓環病毒II型的試劑盒，其特征在于：所述顯色劑選自SYBR green I、Eva green、羥基萘酚藍、鉻黑T中的一種。

6.如權利要求4所述的一種檢測豬圓環病毒II型的試劑盒，其特征在于：所述CDA反應緩沖液包括：Tris-HCl、KCl、(NH₄)₂SO₄、MgSO₄和Triton X-100。

7.如權利要求2所述的一種檢測豬圓環病毒II型的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒反應體系的組成為：

2-50mM Tris-HCl pH8.8

2-20mM KCl

2-20mM(NH₄)₂SO₄

2～20mM MgSO₄

0.1～0.5％TritonX-100

0.2～1M甜菜堿

1～1.6mM dNTP

5～10U Bst DNA聚合酶

100～150μmol/L顯色劑

1～2μM引物PCV2-MF

1～2μM引物PCV2-MR；

反應溶劑為超純水。

8.權利要求7所述的試劑盒非疾病診斷目的的檢測豬圓環病毒II型的方法，包括以下步驟：

步驟1：將待檢測核酸樣本和試劑盒的反應體系混合，制備擴增反應液；

步驟2：上述制備得到的擴增反應液，于60～65℃反應20～80min，根據顯色結果判斷樣品中是否含有豬圓環病毒II型。

9.權利要求1所述的CDA引物對在非疾病診斷目的的豬圓環病毒II型檢測中的應用。

10.權利要求2-7任一項所述的試劑盒在非疾病診斷目的的豬圓環病毒II型檢測中的應用。