[發(fā)明專利]一種人精子膜蛋白SPACA1特異性抗原偶聯(lián)蛋白與抗體的制備方法

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• 申請日: 2022-02-09
• 公開（公告）號: CN114395028A
• 公開（公告）日: 2022-04-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王江;牛遠(yuǎn)杰;李剛;郭戰(zhàn)軍;沈沖;劉子豪;陳昱彤;米洪霖;辛鐘成
• 申請（專利權(quán)）人: 天津市泌尿外科研究所
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C07K19/00;C07K16/18;C07K16/06;G01N33/68
• 代理公司: 天津佳盟知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12002
• 代理人: 林玉慧

1.一種N端人精子膜蛋白SPACA1特異性多肽，其特征在于抗原結(jié)合位點位于人精子頂體區(qū)外膜，多肽序列為人精子膜蛋白SPACA1氨基酸序列中第61位到第74位氨基酸的肽段，并在C端加上半胱氨酸(C)，多肽的氨基酸序列為：NYAPPETEDVSNRNC。

2.一種人精子膜蛋白SPACA1特異性抗原偶聯(lián)蛋白，其特征在于為合成抗原多肽NYAPPETEDVSNRNC通過交聯(lián)劑將多肽氨基酸疏基與匙孔血藍(lán)蛋白(KLH)氨基共價交聯(lián)的混合物。

3.一種抗人精子膜蛋白SPACA1的抗體制備方法，其特征在于包括：

1)、人精子膜蛋白SPACA1特異性抗原表位的分析與設(shè)計；

2)、人精子膜蛋白SPACA1特異性抗原偶聯(lián)蛋白的制備和純化；

3)、制備人工免疫原免疫動物；

4)、收集抗體血清；

5)、飽和硫酸銨法分離純化抗人精子膜蛋白SPACA1IgG抗體；

6)、酶聯(lián)免疫吸附實驗鑒定血清抗體與天然人SPACA1蛋白結(jié)合效價；

7)、細(xì)胞免疫熒光染色定位精子表面SPACA1蛋白分布。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的抗體制備方法，其特征在于所述特異性抗原表位的分析與設(shè)計是利用生物信息軟件對蛋白的氨基酸序列進行抗原表位分析，主要評估跨膜片段、多肽活性、親水性和抗原性指數(shù)；所確定的胞外特異性抗原表位序列為人精子膜蛋白SPACA1氨基酸序列中第61位到第74位氨基酸的肽段，并在C端加上半胱氨酸(C)，多肽的氨基酸序列為：NYAPPETEDVSNRNC。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的抗體制備方法，其特征在于所述偶聯(lián)蛋白為匙孔血藍(lán)蛋白(KLH)。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的抗體制備方法，其特征在于所述人工免疫原為權(quán)利要求2所述人精子膜蛋白SPACA1特異性抗原偶聯(lián)蛋白與完全或不完全弗氏佐劑混合免疫動物。

7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的抗體制備方法，其特征在于所述免疫動物為在實驗動物背部通過多點皮下注射，并經(jīng)二次以上加強免疫，與人精子膜蛋白提取物反應(yīng)血清效價大于1：3200。

8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的抗體制備方法，其特征在于所述分離純化抗人精子膜蛋白SPACA1IgG抗體是經(jīng)過硫酸銨沉淀、蛋白親和純化能夠從抗體血清中獲得高純度的IgG抗體。