[發(fā)明專利]分子邏輯門智能化檢測真菌毒素新方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210120566.2
• 申請日: 2022-02-09
• 公開（公告）號: CN114441745A
• 公開（公告）日: 2022-05-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳俊華;潘家峰;鄧芳
• 申請（專利權(quán)）人: 廣東省科學院生態(tài)環(huán)境與土壤研究所
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;C12Q1/6818;C12N15/11
• 代理公司: 廣州嘉權(quán)專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 齊鍵

本發(fā)明公開了一種分子邏輯門智能化檢測真菌毒素新方法，該方法包括如下步驟：(1)將發(fā)夾探針組加熱至92～95℃，然后冷卻至室溫，使其形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)；(2)將檢測樣品、形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)的發(fā)夾探針組、酶鏈和底物鏈在25±2℃條件下孵育90～95min，檢測熒光信號。本發(fā)明中的檢測方法及檢測試劑盒能夠準確的智能化檢測待測樣品中是否含有OTA、AFB1和ZEN，且特異性好，對于其他真菌毒素等類似物均不會產(chǎn)生假陽性。且靈敏度高，檢出限可達100pM，相比于常規(guī)的檢測技術(shù)更加靈敏智能。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分析檢測領(lǐng)域，具體涉及分子邏輯門智能化檢測真菌毒素新方法。

背景技術(shù)

真菌毒素是由鐮刀菌屬、青霉屬、曲霉屬等真菌在適宜溫、濕度條件下產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物。目前常見的真菌毒素主要有黃曲霉毒素B1(aflatoxins B1,AFB1)、赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)、玉米赤霉烯酮毒素(zearalenone,ZEN)、T-2毒素(T-2toxin,T-2)和伏馬毒素(fumonisin B1,FB)等。大多數(shù)真菌毒素可通過抑制動物體蛋白質(zhì)和相關(guān)酶的合成，破壞細胞結(jié)構(gòu)，損害動物體肝臟、腎臟、神經(jīng)、造血等組織器官，具有致癌、致畸、致突變、生殖紊亂以及免疫抑制作用；且真菌毒素分布廣泛、分子量小、結(jié)構(gòu)以及化學性質(zhì)一般均勻穩(wěn)定，即使高溫烹飪也無法使其分解。

農(nóng)產(chǎn)品在被真菌毒素污染后，往往同時存在多種真菌毒素。而這些真菌毒素一旦通過食物鏈進入人體體內(nèi)，將嚴重威脅人類健康。因此，開發(fā)出一種智能化檢測農(nóng)產(chǎn)品中的真菌毒素含量的方法顯得尤為重要。

相關(guān)技術(shù)中，用于檢測真菌毒素的方法主要包括：高效液相色譜法(HPLC)、薄層色譜法(TLC)、氣相色譜法(GC)和液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS)等。但這些方法均存在較為難以克服的缺陷性，如需要大型儀器檢測，從而檢測成本高昂，而且這些檢測方法受到儀器本身的限制，相對耗時，無法滿足其智能化高效檢測的要求。因此，迫切需要開發(fā)分子邏輯門智能化檢測真菌毒素新方法，以獲得智能化的檢測結(jié)果，從而切實有效的控制真菌毒素的危害。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在至少解決上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問題之一。為此，本發(fā)明提出一種基于分子邏輯門的真菌毒素檢測方法及其應用。該分子邏輯門檢測系統(tǒng)基于“OR-AND”和“OR-INHIBIT”級聯(lián)分子邏輯門實現(xiàn)多種真菌毒素的智能檢測，檢測效果穩(wěn)定，檢測精度高，檢出限低，檢測耗時短，具有極好的實際應用價值。

本發(fā)明的第一個方面，提供一種真菌毒素檢測試劑。

根據(jù)本發(fā)明的第一個方面，在本發(fā)明的一些實施方式中，所述試劑中含有發(fā)夾探針組。

在本發(fā)明的一些優(yōu)選實施方式中，所述發(fā)夾探針組包括發(fā)夾探針A、發(fā)夾探針B、發(fā)夾探針C、發(fā)夾探針D、發(fā)夾探針E、發(fā)夾探針F、發(fā)夾探針G和發(fā)夾探針H中的至少一種。

在本發(fā)明的一些優(yōu)選實施方式中，所述發(fā)夾探針組包括發(fā)夾探針A、發(fā)夾探針B、發(fā)夾探針C、發(fā)夾探針D、發(fā)夾探針E、發(fā)夾探針F、發(fā)夾探針G和發(fā)夾探針H中的至少5種。

在本發(fā)明的一些更優(yōu)選實施方式中，所述發(fā)夾探針組為發(fā)夾探針A、發(fā)夾探針B、發(fā)夾探針C、發(fā)夾探針D、發(fā)夾探針E的組合，或發(fā)夾探針D、發(fā)夾探針E、發(fā)夾探針F、發(fā)夾探針G和發(fā)夾探針H的組合。

在本發(fā)明的一些優(yōu)選實施方式中，所述發(fā)夾探針A～H的核苷酸序列為：

發(fā)夾探針A：

發(fā)夾探針B：

發(fā)夾探針C：

發(fā)夾探針D：5'-GGGGTGTGGGTGGCGTAAAGGGAGCCCATGTATCGAGCTCCCTTTACGCCTGTGT-3'(SEQ ID NO.4)；