[發明專利]分子邏輯門智能化檢測真菌毒素新方法在審

申請號：	202210120566.2	申請日：	2022-02-09
公開（公告）號：	CN114441745A	公開（公告）日：	2022-05-06
發明（設計）人：	陳俊華;潘家峰;鄧芳	申請（專利權）人：	廣東省科學院生態環境與土壤研究所
主分類號：	G01N33/53	分類號：	G01N33/53;C12Q1/6818;C12N15/11
代理公司：	廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205	代理人：	齊鍵
地址：	510650 ***	國省代碼：	廣東;44
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摘要：
搜索關鍵詞：	分子邏輯智能化檢測真菌毒素新方法
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【權利要求書】：

1.一種真菌毒素檢測試劑，其特征在于，所述試劑中含有發夾探針組；

所述發夾探針組包括發夾探針A、發夾探針B、發夾探針C、發夾探針D、發夾探針E、發夾探針F、發夾探針G和發夾探針H中的至少一種；

所述發夾探針A～H的核苷酸序列為：

發夾探針A：5'-GATCGGGTGTGGGTGGCGTAAAGGGAGCATCGGACAGCTCCCTTTACAAAAAAAAAAA-3'(SEQ ID NO.1)；

發夾探針B：5'-GTTGGGCACGTGTTGTCTCTCTGTGTCTCGTGCCCTTCGCTAGGCCCACAGCTCCCTTTACAAAAAAAAAAATGCCCAAC-3'(SEQ ID NO.2)；

發夾探針C：5'-TCATCTATCTATGGTACATTACTATCTGTAATGTGATATGTTTTTTTTTTGCCACCCACACATAGATG-3'(SEQ ID NO.3)；

發夾探針D：5'-GGGGTGTGGGTGGCGTAAAGGGAGCCCATGTATCGAGCTCCCTTTACGCCTGTGT-3'(SEQ ID NO.4)；

發夾探針E：5'-TGTGTGTGTGTAAGGGAGCTCGATACATGGGCTCCCTTTACGCCCCATGTATCGA-3'(SEQ ID NO.5)；

發夾探針F：5'-GATCGGGTGTGGGTGGCGTAAAGGGAGCATCGGACAGCTCCCTTTACGCCACCCACAC-3'(SEQ ID NO.6)；

發夾探針G：5'-GTTGGGCACGTGTTGTCTCTCTGTGTCTCGTGCCCTTCGCTAGGCCCACAGCTCCCTTTACGCCACCCACACTGCCCAAC-3'(SEQ ID NO.7)；

發夾探針H：5'-TCATCTATCTATGGTACATTACTATCTGTAATGTGATATGGTGTGGGTGGCGTAAAGGGAGCATTACAGAT-3'(SEQ ID NO.8)。

2.根據權利要求1所述的真菌毒素檢測試劑，其特征在于，所述真菌毒素包括黃曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮毒素。

3.一種真菌毒素檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中包括權利要求1或2所述的真菌毒素檢測試劑、酶鏈和底物鏈。

4.根據權利要求3所述的真菌毒素檢測試劑盒，其特征在于，所述酶鏈的核苷酸序列為：酶鏈DNA1：5'-ACACAGGCGTAGACTCCGAGCCGGACGAAGTTACCCACACCCC-'3(SEQ ID NO.9)。

5.根據權利要求3所述的真菌毒素檢測試劑盒，其特征在于，所述底物鏈的核苷酸序列為：底物鏈DNA2：5'-TCGATACATGGAACTrAGGTCACACACACACA-'3(SEQ ID NO.10)；其中，rA代表核酸A修飾。

6.根據權利要求5所述的真菌毒素檢測試劑盒，其特征在于，所述底物鏈上修飾有熒光基團和猝滅基團，所述熒光基團和猝滅基團分別修飾于酶切位點的對立兩側。

7.根據權利要求1～2任一項所述的真菌毒素檢測試劑或權利要求3～6任一項所述的真菌毒素檢測試劑盒在食品安全檢測中的應用。

8.一種真菌毒素的檢測方法，包括如下步驟：

(1)將權利要求1中的發夾探針組加熱至92～95℃，然后冷卻至室溫，使其形成發夾結構；

(2)將檢測樣品、形成發夾結構的發夾探針組、權利要求4中的酶鏈和權利要求5中的底物鏈在25±2℃條件下孵育90～95min，檢測熒光信號。

9.根據權利要求8所述的檢測方法，其特征在于，所述檢測樣品為食品。

10.根據權利要求8所述的檢測方法，其特征在于，所述檢測方法執行“OR-AND”和/或“OR-INHIBIT”分子邏輯門；

所述“OR-AND”分子邏輯門的檢測體系為：