[發明專利]偶聯設備及生成偶聯物的方法

有效

• 申請號: 202210117261.6
• 申請日: 2022-02-08
• 公開（公告）號: CN114480115B
• 公開（公告）日: 2023-06-06
• 發明（設計）人: 秦剛;周勝;呂操;約阿希姆·沃爾特
• 申請（專利權）人: 啟德醫藥科技（蘇州）有限公司;利穗科技(蘇州)有限公司
• 主分類號: C12M1/40
• 分類號: C12M1/40;C12M1/00
• 代理公司: 北京永新同創知識產權代理有限公司 11376
• 代理人: 楊勝軍

一種偶聯設備，包括：至少一個流動反應器，其具有進口和出口，流動反應器完全填充介質，例如包括1)色譜珠、纖維或薄膜，和2)生物催化劑的基質，生物催化劑即為連接酶，其固定到介質上；流體輸送單元，其與流動反應器的進口流體連通，并且被配置為根據偶聯過程的不同階段，向流動反應器連續提供至少一種反應流體，例如抗體和連接子?負載物，該至少一種反應流體中包含待生成的偶聯物的第一反應成分和第二反應成分；以及流體收集單元，其與流動反應器的出口流體連通，并且被配置為根據偶聯過程的不同階段，控制對流出流動反應器的出口的流體的收集。在至少一種反應流體連續地流過流動反應器期間，第一反應成分和第二反應成分在連接酶的催化作用下發生偶聯反應而生成偶聯物。

技術領域

本公開內容總體上涉及生物技術和藥物生產領域，更具體地，本公開內容涉及一種偶聯設備及使用該偶聯設備生成偶聯物的方法。

背景技術

偶聯是采用特定的連接子(Linker)通過生物或化學方法將一個分子與另一個分子連接到一起。例如出于生物科學研究、診斷或治療目的，對高質量的偶聯物，尤其是生物偶聯物(Bioconjugate)的需求在迅速增加。生物偶聯物是靶向分子及負載物通過連接子連接而成的，例如包括抗體-藥物偶聯物(ADC)、抗體-免疫激動劑偶聯物、抗體-細胞因子偶聯物、抗體-核素偶聯物等。

以ADC為例，ADC的主要成分包括抗體、連接子和小分子化合物。抗體主要用于將小分子化合物投遞到特定靶點，小分子化合物(包括但不限于細胞毒素)對靶點產生效應。目前FDA批準上市的九種ADC藥物均采用化學偶聯方式形成，即隨機地將細胞毒素偶聯到抗體骨架的賴氨酸或半胱氨酸殘基。

在化學偶聯方式中，在偶聯工序之前，需要先通過上游和下游工藝利用抗體原料完成單抗原液的生產。隨后，在偶聯工序中執行以下步驟。對抗體進行預處理(如化學還原)，接下來偶聯連接子，通過UF/DF和/或色譜分析去除游離的連接子。然后，偶聯小分子化合物，接著再通過陽離子和/或陰離子和/或疏水層析去除聚體。最后，通過UF/DF和/或層析去除游離的小分子化合物。

發明內容

化學偶聯存在諸多問題，例如，偶聯位點隨機、產物異質性、中控復雜且產量擴大存在限制。

首先，化學偶聯的產物通常是結構和成分不均一的混合物。連接子與抗體發生偶聯反應具有高度隨機性，導致偶聯到抗體的小分子化合物的數目和抗體的偶聯位點差異較大，因此導致ADC藥物之類的生物偶聯物具有不同的藥物/抗體比(DAR)值。因此，生物偶聯物呈現高度異質性，導致批間差異性大，治療窗窄，因而給藥物的生產和質量控制帶來很大的挑戰。

其次，如上面所描述的，化學偶聯的生產工藝步驟煩冗，包括多個上游和下游純化步驟，費時且需要大量人工。

再次，在一些情形中，在化學偶聯期間，需要生產人員定時取樣，并隨后計算樣本的DAR值，直至計算結果符合內部質量標準，才進行下一步操作。因此，在這些情形中，DAR的計算過程不但費時，成本相對較高，而且還增加了人為操作錯誤的風險。

另外，化學偶聯通常采用傳統反應釜，其體積限制了擴大生產規模的可能。此外，在偶聯過程中還需要添加有機相，因此偶聯過程難以精確控制。

針對上述技術問題，本公開內容的第一方面提出了一種偶聯設備。該偶聯設備包括：至少一個流動反應器，其具有進口和出口，流動反應器中完全填充有介質(例如包括色譜珠、纖維或薄膜之類的基質)，并且生物催化劑(即連接酶)固定到介質上；流體輸送單元，其與流動反應器的進口流體連通，并且被配置為根據偶聯過程的不同階段，向流動反應器連續提供至少一種反應流體(抗體、連接子-毒素、混合的抗體和連接子-毒素等)，該至少一種反應流體包含待生成的偶聯物的第一反應成分和第二反應成分；以及流體收集單元，其與流動反應器的出口流體連通，并且被配置為根據偶聯過程的不同階段，控制對流出流動反應器的出口的流體的收集。在至少一種反應流體連續地流過流動反應器期間，第一反應成分和第二反應成分在連接酶的催化作用下發生偶聯反應而生成偶聯物。