[發(fā)明專利]人源化廣譜抗新型冠狀病毒單克隆抗體及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210117062.5
• 申請日: 2022-02-07
• 公開（公告）號: CN114426577B
• 公開（公告）日: 2023-10-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 邵一鳴;王錚;李丹;蘇俊威;靳昌忠;任莉
• 申請（專利權(quán)）人: 中國疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病預(yù)防控制中心
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C12N15/13;C12N15/85;C12N5/10;G01N33/569;G01N33/577;A61K39/42;A61P31/14
• 代理公司: 北京市眾天律師事務(wù)所 11478
• 代理人: 李新軍

本發(fā)明公開了一種人源化廣譜抗SARS?COV?2病毒的單克隆中和抗體，本發(fā)明的中和抗體通過單個B細(xì)胞流式分選?抗體基因擴增配對表達技術(shù)篩選獲得，具有獨特的CDR區(qū)域，能特異性與SARS?COV?2結(jié)合并且可以有效中和目前世界衛(wèi)生組織定義的“值得關(guān)切的變異株”（SARS?CoV?2 WT，alpha，Beta，Gamma，Delta，Omicron），尤其是中和Omicron變異毒株的IC50均低于0.1μg/mL。本發(fā)明還涉及該組中和抗體的制備方法和用途。本發(fā)明的4株抗體可以用于針對COVID?19變異毒株全球流行的緊急預(yù)防和或治療，具有全人源化，高表達，穩(wěn)定性好的特點，適合產(chǎn)業(yè)化。此外，該抗體還可用于制備SARS?COV?2病毒檢測試劑，發(fā)現(xiàn)有效中和抗原表位及開發(fā)SARS?COV?2重組蛋白及亞單位疫苗。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明公開了一種多肽，更具體地，本發(fā)明公開一種抗體。

背景技術(shù)

新型冠狀病毒（SARS Cov-2，也稱為2019-nCov） 屬于正鏈 RNA 病毒的一種，屬于冠狀病毒家族的 ? 屬，其編碼四種結(jié)構(gòu)蛋白：spike (S), envelope(E), membrane (M)，nucleocapsid (N)，16 種非結(jié)構(gòu)蛋白及 5-8 種輔助蛋白質(zhì)。SARS Cov-2利用病毒表面的S 蛋白與宿主細(xì)胞受體-血管緊張素轉(zhuǎn)換酶 II（ACE2）進入細(xì)胞。S 蛋白根據(jù)蛋白結(jié)構(gòu)功能又被分為兩個功能單位，即 S1 和 S2 蛋白亞基。S1 可分為 NTD（N-terminal domain）和RBD（Receptor binding site），RBD 區(qū)域長約 240 個氨基酸，主要與宿主細(xì)胞受體結(jié)合，S2 在病毒和細(xì)胞膜融合起作用。根據(jù)已有的報導(dǎo)，中和抗體主要作用于 RBD 區(qū)域，抗體結(jié)合于 RBD，阻礙 RBD 與ACE2 的結(jié)合，從而阻止病毒感染細(xì)胞。

目前國內(nèi)外均有新冠中和抗體的分離研究報道，采用單細(xì)胞分選、抗體基因組深度測序方法，一批針對 RBD 的人源化單克隆抗體被分離出來，如 LYCoV555, REGN-COV2,TY027, CT-P59, JS016, BRII-196, BRII-198 and SCTA01等，這些抗體展現(xiàn)出了較強的體外中和活性（IC501μg/ml），在表達 ACE2 的轉(zhuǎn)基因小鼠動物體內(nèi)也展現(xiàn)出了較好的治療效果，可以顯著降低小鼠肺部的病毒載量。但 SARS-Cov-2 處于不斷變異中，一旦感染了中和表位發(fā)生變異的病毒，則已有的中和抗體將不再具有中和作用。尤其是Omicron毒株快速流行以來，由于其較強的傳播能力和多變異位點，與Alpha、Beta、Gamma和Delta毒株一起被世界衛(wèi)生組織并列為VOC（Variants of concern, 受關(guān)注的變異病毒）。現(xiàn)有上市的單克隆抗體對Omicron中和能力大幅下降，甚至完全失效。因此，有必要分離出更多的強效廣譜中和抗體作為備選，才可以更有效地避免病毒發(fā)生免疫逃逸。本發(fā)明的目的就是提供一組具有廣譜高中和活性抗新型冠狀病毒單克隆抗體，在此基礎(chǔ)上提供所述高中和活性抗新型冠狀病毒單克隆抗體在制備新冠病毒病治療藥物中的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

基于上述發(fā)明目的，本發(fā)明首先提供了一種人源化廣譜抗新型冠狀病毒單克隆抗體，所述抗體的重鏈可變區(qū)的CDR1、CDR2和CDR3以及輕鏈可變區(qū)的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分別如下所示：

（1）SEQ ID NO.1的第26-33、51-58 和97-110位氨基酸以及SEQ ID NO.3的第27-38、56-58、95-103位氨基酸；或者

（2）SEQ ID NO.5的第26-33、51-57和96-106位氨基酸以及SEQ ID NO.7的第27-33、51-53和90-94位氨基酸；或者

（3）SEQ ID NO.9的第26-33、51-58 和97-112位氨基酸以及SEQ ID NO.11的第27-33、51-53、90-98位氨基酸；

（4）SEQ ID NO.13的第26-33、51-58 和97-112位氨基酸以及SEQ ID NO.15的第27-33、51-53、90-98位氨基酸。