[發明專利]用于睪丸癌篩查的標志物、探針組合物及其應用

在審

• 申請號: 202210117048.5
• 申請日: 2022-02-07
• 公開（公告）號: CN114703281A
• 公開（公告）日: 2022-07-05
• 發明（設計）人: 吳寧寧;韓曉亮;連明;王小奇;張聰;魏闖;李永君
• 申請（專利權）人: 博爾誠（北京）科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6837;C12N15/11
• 代理公司: 北京彩和律師事務所 11688
• 代理人: 閆桑田

本發明公開了一種用于睪丸癌篩查的標志物、探針組合物及其應用。本發明使用所述的標志物，能夠靈敏和特異地檢測該基因的甲基化的狀態，從而可以用于對外周血游離DNA的檢測，并且本發明所述的組合物以非侵入性的方式用于無癥狀人群的篩查，降低了侵入性檢測造成的危害，所述的組合物具有更高的靈敏度和準確度，能夠實現實時監測。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種用于睪丸癌篩查的甲基化檢測標志物、探針組合物及其應用。

背景技術

睪丸癌是發生于睪丸的惡性腫瘤，好發于20-35歲的成年男性，占男性腫瘤1％-1.5％。在我國的發病率大約為2/10萬人。睪丸癌晚期多伴有多發轉移，總體預后較差，可以手術切除原發灶，進行放、化療等手段，延長壽命。睪丸癌的診斷的檢查手段一般通過影像學檢查。目前有超聲、CT兩種檢查方法，通常會選用超聲檢查，因為超聲不僅可以了解腫瘤在睪丸內的情況，還能了解是否有腫物轉移，而CT檢查可以確診、鑒別睪丸癌，也可以了解是否有淋巴轉移等情況。早期發現是提高患者生存率和治愈率的關鍵，但目前缺乏準確的更為早期的診斷方法。睪丸癌常用的腫瘤標志物有甲胎蛋白、人絨毛膜促性腺激素和乳酸脫氫酶三種。但這些手段在靈敏性和特異性方面參差不齊。目前，DNA甲基化已被證明具有組織特異性,可用于早期癌癥檢測，并可根據循環腫瘤DNA(ctDNA)甲基化特征追蹤到腫瘤原發部位。

發明內容

本發明的目的在于提供了一種檢測睪丸癌的標志物以及探針組合物，可以用于睪丸癌的篩查，所述標志物以非侵入性的方式用于無癥狀人群的篩查，以及癌癥患者的預后檢測，降低了侵入性檢測造成的危害，具有更高的靈敏度和準確性，且能夠實現實施監測。

本發明具體技術方案如下：

1.一種用于檢測睪丸癌的標志物，所述標志物對應的基因為CMAHP。

2.根據項1所述的標志物，其中，所述標志物包含如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列，優選所述標志物為甲基化后的標志物。

3.一種探針組合物，所述探針組合物包含靶向項1或2所述標志物的甲基化狀態的探針。

4.根據項3所述的探針組合物，其中，所述探針組合物包含靶向高甲基化的所述標志物的第一探針組合物和靶向低甲基化的所述標志物的第二探針組合物，所述第一探針組合物用于與經重亞硫酸鹽轉化的高甲基化的標志物區域雜交，所述第二探針組合物用于與經重亞硫酸鹽轉化的低甲基化的標志物區域雜交。

5.根據項4所述的探針組合物，其中，所述第一探針組合物包括n個探針，所述n個探針與經重亞硫酸鹽轉化的高甲基化的區域的正義鏈和/或反義鏈的每個核苷酸雜交；

優選的，所述第二探針組合物包括m個探針，所述m個探針與經重亞硫酸鹽轉化的低甲基化的區域的正義鏈和/或反義鏈的每個核苷酸雜交。

6.根據項5所述的探針組合物，其中，n和m均是1-10中的任意整數。

7.根據項5或6所述的探針組合物，其中，第n-1個探針和第n個探針之間有x₁個核苷酸重疊，優選的，x₁為0-100中的任意整數；

優選的，第m-1個探針和第m個探針之間有x₂個核苷酸重疊，優選的，x₂為0-100中的任意整數。

8.根據項5-7中任一項所述的探針組合物，其中，所述第一探針組合物包括如SEQID NO:2-3中的一種或兩種，所述第二探針組合物包括如SEQ ID NO:4-5中的一種或兩種。

9.標志物在制備用于檢測睪丸癌的試劑盒中的用途，所述標志物對應的基因為CMAHP。

10.根據項9所述的用途，其中，所述標志物的核苷酸序列包含如SEQ ID NO:1所示的序列，優選所述標志物為甲基化后的標志物。