[發明專利]一種D-氨基酸氧化酶及其在制備L-草銨膦或其中間體中的應用

在審

• 申請號: 202210114692.7
• 申請日: 2022-01-30
• 公開（公告）號: CN116555206A
• 公開（公告）日: 2023-08-08
• 發明（設計）人: 焦琦;王舒;田振華;程占冰;馬帥;成靜
• 申請（專利權）人: 弈柯萊生物科技（上海）股份有限公司
• 主分類號: C12N9/06
• 分類號: C12N9/06;C12N15/53;C12N15/70;C12P9/00;C12P13/04
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 黃益澍

1.一種D-氨基酸氧化酶，其氨基酸序列與SEQ?ID?NO:1相比包含選自以下一個或多個的氨基酸殘基差異：

K29G/H/I/N/Q/W/Y/C/L；V42C/D/E/H/Y；E195N/Y/Q；C234L；V326W；

并具有不低于如SEQ?ID?NO:1的氨基酸序列所示的D-氨基酸氧化酶的活性和/或熱穩定性。

2.如權利要求1所述的D-氨基酸氧化酶，其特征在于，所述D-氨基酸氧化酶的氨基酸序列與SEQ?ID?NO:1相比包含選自以下兩個或多個的氨基酸殘基差異：V42Y、E195Y、V326W、C234L。

3.如權利要求2所述的D-氨基酸氧化酶，其特征在于，所述D-氨基酸氧化酶與SEQ?IDNO:1相比包含C234L的氨基酸殘基差異，并進一步包含V42Y、E195Y和V326W中的一個或兩個的氨基酸殘基差異；

較佳地，所述D-氨基酸氧化酶與SEQ?ID?NO:1相比具有選自以下任一組的氨基酸殘基差異：

C234L和V42Y；

C234L和E195Y；

C234L和V326W；

C234L、K29C和V42Y；

C234L、K29G和V42Y；

C234L、K29L和V42Y；

C234L、V326W和V42Y；

C234L、V42Y和E195Y；

C234L、E195Y和V326W。

4.如權利要求2所述的D-氨基酸氧化酶，其特征在于，所述D-氨基酸氧化酶與SEQ?IDNO:1相比包含E195Y的氨基酸差異，并進一步包含V42Y或V326W的氨基酸殘基差異；

較佳地，所述D-氨基酸氧化酶與SEQ?ID?NO:1相比具有選自以下任一組的氨基酸殘基差異：

E195Y和V42Y；

E195Y和V326W；

E195Y、K29Q和V42Y；

E195Y、K29W和V42Y；

E195Y、K29Y和V42Y。

5.如權利要求1所述的D-氨基酸氧化酶，其特征在于，其氨基酸序列與SEQ?ID?NO:1相比具有選自以下任一組的氨基酸殘基差異：

K29G；K29H；K29I；K29N；K29Q；K29W；K29Y；V42C；V42D；V42E；V42H；V42P；V42Y；E195H；E195N；E195Y；E195Q；C234L；V326W。

6.一種分離的核酸，其特征在于，所述核酸編碼如權利要求1-5任一項所述的D-氨基酸氧化酶。

7.一種重組表達載體，其包含如權利要求6所述的核酸。

8.一種轉化體，其包含如權利要求6所述的核酸或如權利要求7所述的重組表達載體；較佳地，所述轉化體的宿主細胞為埃希氏大腸桿菌(Escherichia?coli)例如E.coliBL21(DE3)。

9.一種制備如權利要求1-5任一項所述的D-氨基酸氧化酶的方法，其特征在于，所述方法包括在適于表達所述D-氨基酸氧化酶的條件下培養如權利要求8所述的轉化體。