[發明專利]一種適用于紫薇花芽的石蠟切片方法

在審

• 申請號: 202210103528.6
• 申請日: 2022-01-19
• 公開（公告）號: CN114509290A
• 公開（公告）日: 2022-05-17
• 發明（設計）人: 顧翠花;尚林雪;王群;王杰;洪思丹;趙雨;張國哲;馬清清
• 申請（專利權）人: 浙江農林大學
• 主分類號: G01N1/06
• 分類號: G01N1/06;G01N1/28;G01N1/30
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明專利屬于石蠟切片技術領域，是一種適用于紫薇花芽的石蠟切片方法。采用本發明改進后的石蠟切片方法對紫薇花芽進行縱切后，避免了常規方法中容易出現浸蠟不充分、切片空洞、材料碎裂、染色不清晰等現象，獲得了組織完整、切片干凈、染色清晰的紫薇花芽切片圖，從而達到了最佳觀察效果。本發明總結出一套簡易、高效適用于紫薇花芽石蠟切片的方法，可以對不同發育時期的紫薇花芽進行石蠟切片進而觀察紫薇花芽分化的全過程，為后續一系列實驗奠定了基礎。

技術領域

本發明涉及一種適用于紫薇花芽的石蠟切片方法，屬于石蠟切片技術領域。

背景技術

紫薇(Lagerstroemia indica L.)是千屈菜科(Lythraceae)紫薇屬(Lagerstroemia)的落葉灌木或小喬木，頂生圓錐花序或集生于新枝條頂端，花型奇特，花期較長，可達100天，又名“百日紅”，“滿堂紅”，是夏季園林應用最廣泛的觀花植物。花芽分化是成花的重要過程，直接影響開花的質量和數量。因此，研究紫薇的花芽分化過程對其花期調控都具有重要意義。

石蠟切片技術是一種用于觀察細胞結構形態以及組織的方法。然而，常規的石蠟切片方法不僅操作過程繁瑣，實驗周期長；而且切片效果差，成功率較低，無法滿足觀察紫薇花芽細胞結構形態變化的需求。目前，以紫薇花芽為材料開展石蠟切片技術的研究較少，且切片效果不夠理想，鑒于此，浙江農林大學紫薇育種研究團隊經過多年的反復試驗，總結出一套簡易、高效的紫薇花芽石蠟切片方法。

發明專利內容

本發明的目的是提供一種適用于紫薇花芽的石蠟切片方法，在常規方法的“脫水、透明、浸蠟、包埋、切片厚度以及染色方法”上進行了改進，使得紫薇花芽石蠟切片的整個制片程序更易操作，并節省了整個實驗時間，縮短了與有毒試劑接觸的時間，提高切片成功率，切片效果也較佳。本發明提供的方法可以對不同發育時期的紫薇花芽進行石蠟切片，進而觀察紫薇花芽分化的整個過程，為后續的一系列實驗奠定了基礎。

為此，一種適用于紫薇花芽的石蠟切片方法步驟如下：

1、固定

將修整后的植物材料，為避免褐化立即放入FAA固定液(V_50％無水乙醇∶甲醛∶冰醋酸為8∶1∶1)中，置于4℃冰箱固定24h以上備用。

2、脫水

脫水處理上按照50％乙醇(30min)→70％乙醇(30min)→70％乙醇(過夜)→85％乙醇(50min)→95％乙醇(50min)→100％乙醇(50min)→100％乙醇(50min)的梯度進行；

注：固定后的材料一般不能在無水乙醇中過夜，可放置在70％無水乙醇中過夜，在常規方法中很容易忽視這個問題。

3、透明

采取無水乙醇∶二甲苯＝3∶1→無水乙醇∶二甲苯＝1∶1→無水乙醇∶二甲1∶3→100％二甲苯→100％二甲苯→100％二甲苯(每一級均處理45min)的梯度進行操作；

4、浸蠟

石蠟∶二甲苯＝1∶3(45℃烘箱過夜)→石蠟∶二甲苯＝1∶1(53℃烘箱4h)→石蠟∶二甲苯＝3∶1(53℃烘箱4h)→加純蠟(60℃烘箱過夜)→早晚每隔12h從烘箱中取出換一次純蠟(60℃換蠟3d)進行浸蠟處理。

注：浸蠟過程中的石蠟是兩種狀態的蠟，與二甲苯配比的是液體熱蠟(56-58℃)，且為避免將植物材料“燙黑化”，最好沿試管壁緩慢滴加熱蠟；純蠟指的提前準備好的固體碎蠟，換入至試管中即可。

5、包埋

將浸蠟3d后的植物材料開蓋2h后進行包埋，此操作的目的是為了將試管內的透明劑(二甲苯)蒸發干凈。所有的包埋工具(解剖針、鑷子等)以及病理學包埋盒均從烘箱中取出進行包埋操作；