[發(fā)明專利]一種單胺氧化酶突變體及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210101602.0
• 申請(qǐng)日: 2022-01-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114480319B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-06-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 祝俊;陳劍;徐飛;余長(zhǎng)泉;李二軍;王苓
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京樺冠生物技術(shù)有限公司;金達(dá)威生物技術(shù)（江蘇）有限公司;江蘇誠(chéng)信藥業(yè)有限公司
• 主分類號(hào): C12N9/06
• 分類號(hào): C12N9/06;C12N15/53;C12N15/70;C12N1/21;C12P17/10;C12R1/19
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 邊人洲

本發(fā)明提供了一種單胺氧化酶突變體及其應(yīng)用，所述單胺氧化酶突變體為發(fā)生了氨基酸突變的單胺氧化酶；所述單胺氧化酶包括SEQ?ID?No.1所示的氨基酸序列；所述氨基酸突變的類型包括V239I、N240D、H241C、V243M、N333S、D344S、R345P、H394A、I396K、A397M或Q400E中的任意一種或至少兩種的組合。本發(fā)明所述單胺氧化酶突變體的酶活得到了顯著提升，降低了(1R,5S)?6,6?二甲基?3?氮雜雙環(huán)[3.1.0]己烷?2?烯的生產(chǎn)難度及生產(chǎn)成本，提高了目標(biāo)產(chǎn)物的得率及生產(chǎn)效率，促進(jìn)了相關(guān)產(chǎn)品的推廣與使用，具有重要的應(yīng)用價(jià)值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于蛋白改造技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種單胺氧化酶突變體及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

波普瑞韋(Boceprevir)(SCH-503034)由美國(guó)先靈葆雅公司研發(fā)，于2011年5月13日經(jīng)美國(guó)食品藥品管理局(FDA)批準(zhǔn)上市，與聚乙二醇干擾素α和利巴韋林聯(lián)用用于治療CHC基因Ⅰ型慢性病型肝炎。波普瑞韋為口服的丙型肝炎病毒非結(jié)構(gòu)蛋白3/4A絲氨酸蛋白酶抑制劑，直接作用于病毒蛋白酶，通過(guò)與NS3/4ASP結(jié)合，發(fā)揮抑制病毒復(fù)制的作用。

目前，臨床前研究表明波普瑞韋能通過(guò)靶向Mpro有效抑制Vero細(xì)胞中的新冠病毒的復(fù)制。

波普瑞韋的結(jié)構(gòu)式如下：

(1R,2S,5S)-6,6-二甲基-3-氮雜雙環(huán)[3.1.0]己烷-2-羧酸甲酯鹽酸鹽是合成波普瑞韋重要的中間體，其結(jié)構(gòu)式如下：

該中間體的合成需要的一個(gè)重要的中間體(1R,5S)-6,6-二甲基-3-氮雜雙環(huán)[3.1.0]己烷-2-烯，其結(jié)構(gòu)式如下：

傳統(tǒng)的(1R,5S)-6,6-二甲基-3-氮雜雙環(huán)[3.1.0]己烷-2-烯的化學(xué)合成中不僅需要使用昂貴的催化劑Pd-C/Pt-C和硝酸銀，而且采用了易燃的氫化鋁鋰或者K₂S₂O₈，反應(yīng)時(shí)對(duì)設(shè)備有特殊要求，導(dǎo)致生產(chǎn)成本較高，能耗和設(shè)備的占用率高，且反應(yīng)中容易生成不同手性的副產(chǎn)品，大大增加了生產(chǎn)成本和后處理成本的同時(shí)，還嚴(yán)重影響了產(chǎn)品的收率和生產(chǎn)效益。

因此，如何提供一種成本低、生產(chǎn)效率高的(1R,5S)-6,6-二甲基-3-氮雜雙環(huán)[3.1.0]己烷-2-烯的合成方法，已成為亟待解決的問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足和實(shí)際需求，本發(fā)明提供一種單胺氧化酶突變體及其應(yīng)用，所述單胺氧化酶可以使(1R,5S)-6,6-二甲基-3-氮雜雙環(huán)[3.1.0]己烷-2-烯在低溫條件下通過(guò)溫和反應(yīng)生成，大大降低了生產(chǎn)成本，并提高了生產(chǎn)效率。

為達(dá)此目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

第一方面，本發(fā)明提供了一種單胺氧化酶突變體，所述單胺氧化酶突變體為發(fā)生了氨基酸突變的單胺氧化酶；

所述單胺氧化酶包括SEQ?ID?No.1所示的氨基酸序列；

所述氨基酸突變的類型包括V239I、N240D、H241C、V243M、N333S、D344S、R345P、H394A、I396K、A397M或Q400E中的任意一種或至少兩種的組合。

SEQ?ID?No.1：