[發明專利]一種單胺氧化酶突變體及其應用

有效

• 申請號: 202210101602.0
• 申請日: 2022-01-27
• 公開（公告）號: CN114480319B
• 公開（公告）日: 2023-06-30
• 發明（設計）人: 祝俊;陳劍;徐飛;余長泉;李二軍;王苓
• 申請（專利權）人: 南京樺冠生物技術有限公司;金達威生物技術（江蘇）有限公司;江蘇誠信藥業有限公司
• 主分類號: C12N9/06
• 分類號: C12N9/06;C12N15/53;C12N15/70;C12N1/21;C12P17/10;C12R1/19
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 邊人洲

1.一種單胺氧化酶突變體，其特征在于，所述單胺氧化酶突變體為發生了氨基酸突變的單胺氧化酶；

所述單胺氧化酶突變體在SEQ?ID?No.1所示的氨基酸序列基礎上發生如下突變中任意一種：

(1)H394A、I396K、A397M和Q400E；

(2)N333S、D344S、R345P、H394A、I396K、A397M和Q400E；

(3)V239I、N240D、H241C、V243M、N333S、D344S、R345P、H394A、I396K、A397M和Q400E。

2.一種核酸分子，其特征在于，所述核酸分子編碼權利要求1所述的單胺氧化酶突變體。

3.一種表達載體，其特征在于，所述表達載體含有至少一個拷貝的權利要求2所述的核酸分子。

4.一種單胺氧化酶突變體轉化子，其特征在于，所述單胺氧化酶突變體轉化子為表達權利要求1所述的單胺氧化酶突變體的基因工程菌株。

5.根據權利要求4所述的單胺氧化酶突變體轉化子，其特征在于，所述單胺氧化酶突變體轉化子含有權利要求2所述的核酸分子。

6.根據權利要求4所述的單胺氧化酶突變體轉化子，其特征在于，所述單胺氧化酶突變體轉化子含有權利要求3所述的表達載體。

7.根據權利要求4所述的單胺氧化酶突變體轉化子，其特征在于，所述基因工程菌株為大腸桿菌、畢氏酵母或枯草芽孢桿菌中的任意一種。

8.一種權利要求1所述的單胺氧化酶突變體的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括：

構建權利要求3所述的表達載體，轉化至受體細胞中，構建單胺氧化酶突變體轉化子；

培養所述單胺氧化酶突變體轉化子，收集培養物，得到所述單胺氧化酶突變體。

9.一種(1R,5S)-6,6-二甲基-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-烯的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括：

向含有權利要求1所述的單胺氧化酶突變體的溶液中加入6,6-二甲基-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷，反應，得到所述(1R,5S)-6,6-二甲基-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-烯。

10.根據權利要求9所述的(1R,5S)-6,6-二甲基-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-烯的制備方法，其特征在于，所述6,6-二甲基-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷的終濃度為120～180g/L。

11.根據權利要求9所述的(1R,5S)-6,6-二甲基-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-烯的制備方法，其特征在于，所述反應的溫度為20～25℃，所述反應的pH值為7.0～7.5，所述反應的時間為20～28h。

12.根據權利要求9所述的(1R,5S)-6,6-二甲基-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-烯的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括：

將6,6-二甲基-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷溶解于亞硫酸氫鈉溶液中，制成6,6-二甲基-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷水溶液；

將單胺氧化酶突變體溶解于磷酸氫二鈉溶液中，制成單胺氧化酶突變體溶液；

向所述單胺氧化酶突變體溶液中滴加所述6,6-二甲基-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷水溶液至終濃度為120～180g/L，在溫度為20～25℃、pH值為7.0～7.5條件下反應20～28h，除酶并萃取后，得到所述(1R,5S)-6,6-二甲基-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-烯。

13.權利要求1所述的單胺氧化酶突變體、權利要求4所述的單胺氧化酶突變體轉化子或權利要求9所述的(1R,5S)-6,6-二甲基-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-烯的制備方法中的任意一種或至少兩種的組合在制備(1R,5S)-6,6-二甲基-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-烯、(1R,2S,5S)-6,6-二甲基-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-羧酸甲酯鹽酸鹽或波普瑞韋中的應用。