[發明專利]一種四種腸道病毒的核酸檢測試劑盒、引物探針組及檢測方法

在審

• 申請號: 202210098940.3
• 申請日: 2022-01-27
• 公開（公告）號: CN114410842A
• 公開（公告）日: 2022-04-29
• 發明（設計）人: 陳偉珊;孫江山;吳純陽
• 申請（專利權）人: 廣州生凌醫療科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 南昌逸辰知識產權代理事務所(普通合伙) 36145
• 代理人: 劉林艷

1.腸道病毒EV、EV71、CA16、CA6的引物探針組，其特征在于：

其中，EV的上游引物為序列EV-F1、EV-F2；下游引物為序列EV-R，特異性探針為序列EV-P，其中上游引物的核苷酸序列分別如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2所示；下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；特異性探針的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示；

EV71的上游引物為序列EV71-F；下游引物為序列EV71-R，特異性探針為序列EV71-P，其中上游引物的核苷酸序列分別如SEQ ID NO:5所示；下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示；特異性探針的核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示；

CA16的上游引物為序列CA16-F；下游引物為序列CA16-R，特異性探針為序列CA16-P，其中上游引物的核苷酸序列分別如SEQ ID NO:8所示；下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示；特異性探針的核苷酸序列如SEQ ID NO:10所示；

CA6的上游引物為序列CA6-F；下游引物為序列CA6-R，特異性探針為序列CA6-P1、CA6-P2，其中上游引物的核苷酸序列分別如SEQ ID NO:11所示；下游引物的核苷酸序列如SEQID NO:12所示；特異性探針的核苷酸序列如SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14所示。

2.腸道病毒EV、EV71、CA16、CA6的四重核酸檢測試劑盒，其特征在于，該試劑盒包括如權利要求1所述的引物探針組。

3.根據權利要求2所述的腸道病毒EV、EV71、CA16、CA6的四重核酸檢測試劑盒，其特征在于，所述腸道病毒EV的特異性探針序列的5’端用ROX修飾，3’端用BHQ2修飾；所述EV71的特異性探針序列的5’端用CY5修飾，3’端用BHQ2修飾；所述CA16的特異性探針序列9的5’端用JOE修飾，3’端用BHQ1修飾；所述CA6的特異性探針序列的5’端用FAM修飾，3’端用BHQ1修飾。

4.根據權利要求2所述的腸道病毒EV、EV71、CA16、CA6的四重核酸檢測試劑盒，其特征在于，由熒光PCR檢測反應液、權利要求1所述的引物探針組混合液、酶混合液、陽性對照品、陰性對照品組成。

5.根據權利要求4所述的腸道病毒EV、EV71、CA16、CA6的四重核酸檢測試劑盒，其特征在于，成分如下所示：

(1)RT-PCR反應液：包括熒光PCR緩沖液、dNTP、DEPC水；

(2)引物探針混合液：包括權利要求1所述的引物探針組；

(3)混合酶液：包括RNA酶抑制劑、逆轉錄酶、DNA聚合酶；

(4)陽性對照：包括含權利要求1所述引物探針組的擴增目的片段的EV、EV71、CA16、CA6源性RNA；

(5)陰性對照：為TE溶液。

6.根據權利要求2所述的腸道病毒EV、EV71、CA16、CA6的四重核酸檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒于-20℃避光儲存。

7.根據權利要求2所述的腸道病毒EV、EV71、CA16、CA6的四重核酸檢測試劑盒，其特征在于，其中正向引物、反向引物、特異性熒光探針的摩爾比為：

EV：200：200：160；

EV71：400：200：600；

CA16：200：300：600；

CA6：200：200：60：60。