[發(fā)明專利]一種四種腸道病毒的核酸檢測(cè)試劑盒、引物探針組及檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210098940.3
• 申請(qǐng)日: 2022-01-27
• 公開（公告）號(hào): CN114410842A
• 公開（公告）日: 2022-04-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳偉珊;孫江山;吳純陽(yáng)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣州生凌醫(yī)療科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 南昌逸辰知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 36145
• 代理人: 劉林艷

本發(fā)明提出了一種四種腸道病毒的核酸檢測(cè)試劑盒、引物探針組及檢測(cè)方法，屬于基因工程技術(shù)領(lǐng)域，腸道病毒EV的上游引物為序列EV?F1、EV?F2；下游引物為序列EV?R，特異性探針為序列EV?P，EV71的上游引物為序列EV71?F；下游引物為序列EV71?R，特異性探針為序列EV71?P，CA16的上游引物為序列CA16?F；下游引物為序列CA16?R，特異性探針為序列CA16?P，CA6的上游引物為序列CA6?F；下游引物為序列CA6?R，特異性探針為序列CA6?P1、CA6?P2，本發(fā)明的檢測(cè)試劑盒通過(guò)一步法熒光定量PCR進(jìn)行檢測(cè)，操作簡(jiǎn)便，可快速讀取結(jié)果。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種四種腸道病毒的核酸檢測(cè)試劑盒、引物探針組及檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

腸道病毒科屬于腸道小RNA病毒科腸道病毒屬，傳統(tǒng)上分為脊髓灰質(zhì)炎病毒(Poliovirus，PV)、埃柯病毒(Echovirus，Echo)、柯薩奇病毒A、B組(CoxsackievirusA、B，CVA、B)及新型腸道病毒。在最新的腸道病毒分類中，國(guó)際病毒分類委員會(huì)(ICTV)根據(jù)生物學(xué)及遺傳特性將其分為4個(gè)組，分別為腸道病毒A、B、C、D組。至今已報(bào)道的腸道病毒血清型超過(guò)百種。

手足口病是由多種腸道病毒（以柯薩奇A組16型、腸道病毒71型多見）引起的急性傳染病。多見于學(xué)齡前兒童，以發(fā)熱和手、足、口腔等部位的皮疹，皰疹或皰疹性咽峽炎為主要特征。少數(shù)重癥病例（多由EV71感染引起）可出現(xiàn)無(wú)菌性腦膜炎、腦干腦炎、神經(jīng)源性肺水腫及急性弛緩性癱瘓等嚴(yán)重并發(fā)癥，并導(dǎo)致較高的病死率和致殘率，嚴(yán)重危害兒童身體健康和生命安全。患兒和隱性感染者為主要傳染源，手足口病隱性感染率高。本病一年四季均可發(fā)生，但以夏秋季節(jié)為多見，發(fā)病以4-9月為主。任何年齡均可發(fā)病，尤以3歲以下年齡組發(fā)病率最高。本病傳染性強(qiáng)，易引起流行，嬰幼兒和兒童普遍易感。

目前腸道病毒檢測(cè)方法主要包括三類：病毒分離培養(yǎng)、免疫學(xué)方法、分子生物學(xué)方法。病毒分離培養(yǎng)是病毒性疾病診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但其操作繁瑣，檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，且陽(yáng)性率較低。免疫學(xué)方法為傳統(tǒng)分型的主要方法，但抗血清的來(lái)源很有限，無(wú)法滿足臨床病原診斷的要求。而基于PCR等相關(guān)技術(shù)的分子生物學(xué)方法以其靈敏、快捷等優(yōu)勢(shì)得到極大發(fā)展。多重實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)以其全封閉單管擴(kuò)增、簡(jiǎn)便快捷、重復(fù)性好、實(shí)時(shí)定量、污染少等優(yōu)勢(shì)，克服了以往臨床診斷的缺陷，具有高度的特異性和敏感性，為臨床診斷提供了準(zhǔn)確可靠的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)，可作為一種臨床病原診斷的有效、快速的檢測(cè)手段。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提出一種四種腸道病毒的核酸檢測(cè)試劑盒、引物探針組及檢測(cè)方法，通過(guò)PCR反應(yīng)，可以從糞便標(biāo)本中同時(shí)檢測(cè)出是否有腸道病毒的存在，并同時(shí)進(jìn)行主要腸道病毒型別的分型鑒定，比單重?zé)晒舛縋CR方法更便捷迅速、節(jié)約成本。

本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的：

本發(fā)明提供一種腸道病毒EV、EV71、CA16、CA6的引物探針組，其中，腸道病毒EV的上游引物為序列EV-F1、EV-F2；下游引物為序列EV-R，特異性探針為序列EV-P，其中上游引物的核苷酸序列分別如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2所示；下游引物的核苷酸序列如SEQ IDNO:3所示；特異性探針的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示；

EV71的上游引物為序列EV71-F；下游引物為序列EV71-R，特異性探針為序列EV71-P，其中上游引物的核苷酸序列分別如SEQ ID NO:5所示；下游引物的核苷酸序列如SEQ IDNO:6所示；特異性探針的核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示；

CA16的上游引物為序列CA16-F；下游引物為序列CA16-R，特異性探針為序列CA16-P，其中上游引物的核苷酸序列分別如SEQ ID NO:8所示；下游引物的核苷酸序列如SEQ IDNO:9所示；特異性探針的核苷酸序列如SEQ ID NO:10所示；