[發明專利]一種利用氘帶內標物檢測食品中愛德萬甜的方法

有效

• 申請號: 202210098589.8
• 申請日: 2022-01-27
• 公開（公告）號: CN114577928B
• 公開（公告）日: 2023-10-03
• 發明（設計）人: 勇艷華;邊海濤;毛希琴;李莉
• 申請（專利權）人: 大連市檢驗檢測認證技術服務中心
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 遼寧鴻文知識產權代理有限公司 21102
• 代理人: 王海波;苗青

1.一種利用氘帶內標物檢測食品中愛德萬甜的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)配制標準溶液

①愛德萬甜標準儲備液：稱取愛德萬甜標準物質于容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，得到1mg/mL的標準儲備液；4℃下避光保存，所述的愛德萬甜作為外標物；

②愛德萬甜標準中間溶液：將愛德萬甜標準儲備液置于容量瓶中，用甲醇稀釋到刻度配制成濃度為10μg/mL的標準中間溶液(1)，4℃下避光保存；另外將愛德萬甜標準儲備液置于容量瓶中，用甲醇稀釋到刻度配制成濃度為1μg/mL的標準中間溶液(2)，4℃下避光保存；

③愛德萬甜-D3標準儲備溶液：將愛德萬甜-D3標準物質用甲醇溶解，得到1mg/mL的標準儲備液；4℃下避光保存，所述的愛德萬甜-D3作為氘帶內標物；

④愛德萬甜-D3標準中間溶液：將愛德萬甜-D3標準儲備液置于容量瓶中，用甲醇稀釋到刻度配制成濃度為10μg/mL的標準中間溶液，4℃下避光保存；

⑤標準工作溶液:分別移取愛德萬甜標準中間溶液(2)10μL、100μL、500μL、1mL、2mL、5mL，和愛德萬甜-D3標準中間溶液10μL，置于容量瓶中采用乙腈定容，分別得濃度為1.0ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL愛德萬甜系列標準工作溶液，每個標準工作溶液還有愛德萬甜-D3 10ng/mL；

(2)樣品的前處理方法

準確稱取樣品2g，置于50mL具塞離心管中，加入200μL濃度為10μg/mL的愛德萬甜-D3標準中間溶液，加入3mL水，渦旋振蕩30s，加入2g NaCl后，加入20mL乙腈，以12000r/min離心3min，取2mL乙腈層于離心管中，加入50mg C₁₈，渦旋1min，以12000r/min離心5min，取上清液，過0.22μm濾膜，供液相色譜-串聯質譜儀分析；

(3)確定液相色譜-串聯質譜分析參考條件

(5)定性判定

5.1)按照高效液相色譜-串聯質譜條件測定步驟(1)⑤得到的愛德萬甜系列標準工作溶液,得到系列標準溶液中愛德萬甜的色譜保留時間及定量離子對和定性離子對色譜峰，以定量離子對豐度的百分比作為定性離子對的相對豐度，記錄標準工作溶液中愛德萬甜的相對離子豐度；

5.2)再按照高效液相色譜-串聯質譜條件測定樣品，得到樣品中愛德萬甜相應的色譜峰；其中，測定樣品過程中高效液相色譜-串聯質譜條件與5.1)相同；

樣品中應呈現愛德萬甜定量離子對和定性離子對的色譜峰，色譜峰保留時間與標準溶液中愛德萬甜色譜峰保留時間一致，變化范圍在±2.5％之內；并且相對離子豐度與相當濃度標準溶液的離子相對豐度比的偏差不超過表3規定范圍，則可以判定樣品中存在愛德萬甜；

表3定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差

相對豐度(％)	最大允許偏差(％)
k＞50％	±20
50％≥k＞20％	±25
20％≥k＞10％	±30
k≤10％	±50

(6)定量測定

測定步驟(1)⑤得到的愛德萬甜系列標準工作溶液中愛德萬甜和愛德萬甜-D3的含量及相應的色譜峰面積，以愛德萬甜和愛德萬甜-D3濃度比為橫坐標，以愛德萬甜和愛德萬甜-D3峰面積比為縱坐標，得內標法標準曲線；樣品溶液中愛德萬甜的含量，從內標法標準曲線中確定；

樣品中愛德萬甜含量，按公式(1)進行計算；

式中：X表示樣品中愛德萬甜的含量，單位為μg/kg；C表示從內標法標準曲線中讀出的樣品溶液中愛德萬甜的濃度，ng/mL；V表示樣品提取液體積，mL；m表示樣品的質量，g；

計算結果以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示，計算結果保留三位有效數字。

2.根據權利要求1所述的一種利用氘帶內標物檢測食品中愛德萬甜的方法，其特征在于，所述步驟(3)中，液相色譜-串聯質譜分析參考條件如下：

①色譜參考條件

a)色譜柱：C₁₈柱，4.6mm×50mm，2.7μm；

b)流動相：A：水，B：乙腈，梯度洗脫；

c)流速：0.35mL/min；

d)柱溫：30℃；

e)進樣量：2μL；

梯度洗脫程序見表1；

表1

②質譜參考條件

離子源：電噴霧離子源ESI；

檢測方式：多反應監測MRM；

掃描方式：正離子模式；

離子化電壓IS：5500V；

霧化氣Gas1：50psi；

輔助氣Gas2：50psi；

氣簾氣壓力CUR：35psi；

霧化溫度TEM：500℃。