[發明專利]一種CPA型吲哚生物堿類化合物及其制備方法與用途

有效

• 申請號: 202210098566.7
• 申請日: 2022-01-27
• 公開（公告）號: CN114409660B
• 公開（公告）日: 2023-03-17
• 發明（設計）人: 代家猛;楊鳳仙;王晉;張建鐸;孔維松;米其利;李銀科;楊光宇;汪偉光;周敏;胡秋芬
• 申請（專利權）人: 云南中煙工業有限責任公司
• 主分類號: C07D487/06
• 分類號: C07D487/06;A01N43/90;A01P1/00;C12P17/18;C12N1/14;C12R1/66
• 代理公司: 北京市領專知識產權代理有限公司 11590
• 代理人: 李靜;任永利

1.一種CPA型吲哚生物堿類化合物的制備方法，其特征在于，所述化合物的制備包括以下步驟：

A、浸膏提取：使用花斑曲霉菌株YATS1111對培養基進行發酵，其發酵產物用90wt%~99wt%乙醇超聲提取并過濾，濾液濃縮，然后加入乙酸乙酯與3wt%酒石酸水溶液的混合液充分攪拌均勻，靜置分層后分出水相，水相再用Na₂CO₃調節pH至9.0，并用乙酸乙酯再次萃取，乙酸乙酯相減壓濃縮成浸膏，供柱層析分離；

其中，所述花斑曲霉菌株YATS1111保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號是CGMCC NO.19910；

乙酸乙酯與3wt%酒石酸水溶液的混合液中，乙酸乙酯與3wt%酒石酸水溶液的體積比為1:1~1:2；

所述培養基包含：大米和營養液，兩者質量體積比是600~400g:60~400 mL；

所述營養液的組成為：葡萄糖5wt%、蛋白胨0.15wt%、酵母0.5wt%、磷酸二氫鉀0.05wt%、硫酸鎂0.05wt%、硫酸錳0.05wt%、檸檬酸二銨0.2wt%、牛肉膏0.5wt%，其余量為水，營養液pH為6.8；

B、硅膠柱層析：將步驟A得到的浸膏用200~300目硅膠干法裝柱，進行硅膠柱層析；以體積配比分別為10:0、9:1、8:2、7:3、6:4、5:5的氯仿-甲醇溶液進行梯度洗脫，合并相同極性的部分，收集各部分洗脫液并濃縮；其中，所述硅膠與所述浸膏的質量比為2~5；

收集其中用體積比為9:1的氯仿-甲醇溶液洗脫時得到的洗脫液，稱為第一洗脫液；將上述第一洗脫液濃縮，再次用硅膠層析柱繼續分離，用體積配比依次為9:1、8:2、7:3、6:4、5:5的一系列氯仿-丙酮溶液進行梯度洗脫，收集其中用體積比為8:2的氯仿-丙酮溶液洗脫時得到的洗脫液，稱為第二洗脫液；

C、高效液相色譜分離：將B步驟最終得到的第二洗脫液濃縮，進行高效液相色譜進行分離純化，所述高效液相色譜法分離純化是采用21.2 mm×250 mm，5 μm的ZorbaxPrepHT GF色譜柱，流速為20 mL/min，流動相為60wt%的甲醇水溶液，紫外檢測器檢測波長為405 nm，第二洗脫液每次進樣200 μL，收集每次進樣后色譜峰保留時間為23.8 min時所對應的洗脫液，稱為第三洗脫液，將該第三洗脫液脫除溶劑后即得所述的吲哚生物堿類化合物；

所述吲哚生物堿類化合物分子式為：C₂₀H₁₈N₄O₂，其具有下述結構：

。

2.根據權利要求1所述的吲哚生物堿類化合物的制備方法，其特征在于，所述步驟A中，乙醇的濃度為95wt%。

3.根據權利要求1所述的吲哚生物堿類化合物的制備方法，其特征在于，步驟B中，所述浸膏在經硅膠柱層析前，將浸膏用甲醇溶解后，用重量比1.5 ~ 2.5倍的80 ~ 120目硅膠拌樣。

4.根據權利要求1所述的吲哚生物堿類化合物的制備方法，其特征在于，所述步驟C中，高效液相色譜法分離純化后，所得吲哚生物堿類化合物再次用甲醇溶解，再以甲醇為流動相，用葡聚糖凝膠柱層析分離，以進一步分離純化化合物。