[發明專利]非洲豬瘟病毒檢測用生物材料、試劑盒和非診斷目的的非洲豬瘟病毒的檢測方法

有效

• 申請號: 202210097900.7
• 申請日: 2022-01-27
• 公開（公告）號: CN114381553B
• 公開（公告）日: 2023-07-04
• 發明（設計）人: 趙卉;李燦鵬;張亞平;劉會芳
• 申請（專利權）人: 云南大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6816;G01N21/78;G01N21/31
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 張夢澤

本發明提供了非洲豬瘟病毒檢測用生物材料、試劑盒和非診斷目的的非洲豬瘟病毒的檢測方法，屬于分子檢測技術領域；所述非洲豬瘟病毒檢測用生物材料，包括與非洲豬瘟病毒捕獲探針化學結合的AuNPs@ZnFesubgt;2/subgt;Osubgt;4/subgt;@COF材料以及負載有非洲豬瘟病毒標記探針和輔助探針的CuOsubgt;2/subgt;。本發明的非洲豬瘟病毒檢測用生物材料能夠特異性結合非洲豬瘟病毒并顯色，能夠用于檢測非洲豬瘟病毒。

技術領域

本發明屬分子檢測技術領域，具體涉及非洲豬瘟病毒檢測用生物材料、試劑盒和非診斷目的的非洲豬瘟病毒的檢測方法。

背景技術

非洲豬瘟病毒(ASFV,African?swine?fever?virus)是非洲豬瘟病毒科(Asfarviridae)下僅有的種，具有傳染性和極高的致病性。ASFV是所發現的僅有的蟲媒DNA病毒，主要依靠軟體蜱科(Argasidae)下鈍緣蜱屬(Ornithodoros)的軟壁虱進行傳播。非洲豬瘟病毒的檢測對于非洲豬瘟疫情控制至關重要。

現有技術中，可用于非洲豬瘟病毒檢測且不受昂貴儀器限制的常用方法有膠體金免疫層析法和酶聯免疫吸附法(ELISA法)。其中，膠體金免疫層析法，操作簡單、快速，但該方法的靈敏度較差，還會出現假陰性結果，存在局限性。ELISA方法操作簡單，靈敏度高，但是特異性有待提高，存在假陽性結果。目前缺少一種靈敏度高且特異性強的非洲豬瘟病毒檢測方法。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供非洲豬瘟病毒檢測用生物材料、試劑盒和非診斷目的的非洲豬瘟病毒的檢測方法，本發明的非洲豬瘟病毒檢測用生物材料用于非洲豬瘟病毒檢測，靈敏度高且特異性強。

本發明提供了一種非洲豬瘟病毒檢測用生物材料，包括獨立包裝的第一材料和第二材料；

所述第一材料包括非洲豬瘟病毒捕獲探針和與所述非洲豬瘟病毒捕獲探針化學結合的AuNPs@ZnFe₂O₄@COF材料；所述AuNPs@ZnFe₂O₄@COF材料包括ZnFe₂O₄@COF和負載于所述ZnFe₂O₄@COF表面的金納米粒子；

所述第二材料包括負載有非洲豬瘟病毒標記探針和輔助探針的CuO₂。

優選的，所述第一材料的制備方法包括以下步驟：

將非洲豬瘟病毒捕獲探針與AuNPs@ZnFe₂O₄@COF材料混合，進行化學結合，得到第一材料。

優選的，所述第二材料的制備方法包括以下步驟：

將非洲豬瘟病毒標記探針、輔助探針和CuO₂混合，進行化學結合，得到第二材料。

優選的，所述非洲豬瘟病毒捕獲探針的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示；所述非洲豬瘟病毒標記探針的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.2所示；所述輔助探針的核苷酸序列如SEQID?NO.3所示。

本發明還提供了一種非洲豬瘟病毒檢測用試劑盒，包括上述方案所述的非洲豬瘟病毒檢測用生物材料和CuO₂的顯色底物。

本發明還提供了一種非診斷目的的非洲豬瘟病毒的檢測方法，包括以下步驟：

1)將上述方案所述的非洲豬瘟病毒檢測用生物材料中的第一材料和待測樣本混合，進行第一孵育，去除未結合物，得到第一孵育產物；

2)向所述第一孵育產物中加入上述方案所述的非洲豬瘟病毒檢測用生物材料中的第二材料，進行第二孵育，去除未結合物，得到第二孵育產物；