[發(fā)明專(zhuān)利]非洲豬瘟病毒檢測(cè)用生物材料、試劑盒和非診斷目的的非洲豬瘟病毒的檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210097900.7
• 申請(qǐng)日: 2022-01-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114381553B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-07-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙卉;李燦鵬;張亞平;劉會(huì)芳
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 云南大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/70
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/70;C12Q1/6816;G01N21/78;G01N21/31
• 代理公司: 北京高沃律師事務(wù)所 11569
• 代理人: 張夢(mèng)澤

1.一種非洲豬瘟病毒檢測(cè)用生物材料，包括獨(dú)立包裝的第一材料和第二材料；

所述第一材料包括非洲豬瘟病毒捕獲探針和與所述非洲豬瘟病毒捕獲探針化學(xué)結(jié)合的AuNPs@ZnFe₂O₄@COF材料；所述AuNPs@ZnFe₂O₄@COF材料包括ZnFe₂O₄@COF和負(fù)載于所述ZnFe₂O₄@COF表面的金納米粒子；

所述第二材料包括負(fù)載有非洲豬瘟病毒標(biāo)記探針和輔助探針的CuO₂；

所述非洲豬瘟病毒捕獲探針的核苷酸序列為：5’-tcaaagcaaaggtaatcatcatcgc-3’-(CH₂)₆-SH；

所述非洲豬瘟病毒標(biāo)記探針的核苷酸序列為：5’-tcgagttacgctaagcactgggttggtattcctcc-3’-(CH₂)₆-SH；

所述輔助探針的核苷酸序列為：5’-cttagcgtaactcgaggaggaataccaacccagtg-3’。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的非洲豬瘟病毒檢測(cè)用生物材料，其特征在于，所述第一材料的制備方法包括以下步驟：

將非洲豬瘟病毒捕獲探針與AuNPs@ZnFe₂O₄@COF材料混合，進(jìn)行化學(xué)結(jié)合，得到第一材料。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的非洲豬瘟病毒檢測(cè)用生物材料，其特征在于，所述第二材料的制備方法包括以下步驟：

將非洲豬瘟病毒標(biāo)記探針、輔助探針和CuO₂混合，進(jìn)行化學(xué)結(jié)合，得到第二材料。

4.一種非洲豬瘟病毒檢測(cè)用試劑盒，包括權(quán)利要求1~3任意一項(xiàng)所述的非洲豬瘟病毒檢測(cè)用生物材料和CuO₂的顯色底物。

5.一種非診斷目的的非洲豬瘟病毒的檢測(cè)方法，包括以下步驟：

1）將權(quán)利要求1~3任意一項(xiàng)所述的非洲豬瘟病毒檢測(cè)用生物材料中的第一材料和待測(cè)樣本混合，進(jìn)行第一孵育，去除未結(jié)合物，得到第一孵育產(chǎn)物；

2）向所述第一孵育產(chǎn)物中加入權(quán)利要求1~3任意一項(xiàng)所述的非洲豬瘟病毒檢測(cè)用生物材料中的第二材料，進(jìn)行第二孵育，去除未結(jié)合物，得到第二孵育產(chǎn)物；

3）向所述第二孵育產(chǎn)物中加入CuO₂的顯色底物，進(jìn)行第三孵育，測(cè)試所得第三孵育液在510?nm處的吸光值；

根據(jù)預(yù)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)和所述吸光值，獲得待測(cè)樣品中非洲豬瘟病毒的濃度；所述標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)為非洲豬瘟病毒濃度的對(duì)數(shù)與510?nm吸光值的線(xiàn)性關(guān)系曲線(xiàn)。

6.根據(jù)權(quán)利要5所述的非診斷目的的非洲豬瘟病毒檢測(cè)方法，其特征在于，所述步驟1）或步驟2）中，所述去除未結(jié)合物的方式包括：

對(duì)第一孵育或第二孵育后所得孵育液進(jìn)行磁力吸附分離，得到上清液和下層濁液；

對(duì)下層濁液進(jìn)行洗滌。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的非診斷目的的非洲豬瘟病毒檢測(cè)方法，其特征在于，步驟1）中，所述第一孵育的時(shí)間為30~60min。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的非診斷目的的非洲豬瘟病毒檢測(cè)方法，其特征在于，步驟2）中，所述第二孵育的時(shí)間為30~60min。

9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的非診斷目的的非洲豬瘟病毒檢測(cè)方法，其特征在于，步驟3）中，所述第三孵育的溫度為50~60℃；所述第三孵育的時(shí)間為15~30min。