[發(fā)明專利]一種單糖的分析方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210097752.9
• 申請日: 2022-01-27
• 公開（公告）號(hào): CN114577958A
• 公開（公告）日: 2022-06-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 肖永成;林衛(wèi)軍;石國良;王羽娟;張蕾;王建智
• 申請（專利權(quán)）人: 唐傳生物科技（廈門）有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/06
• 分類號(hào): G01N30/06;G01N30/34;G01N30/74;G01N30/88;G01N30/89
• 代理公司: 廈門致群財(cái)富專利代理事務(wù)所(普通合伙) 35224
• 代理人: 鄧貴琴

1.一種用于測定單糖的HPLC方法，其特征在于，所述的方法包括步驟：

(1)通過高效液相對樣品中的單糖進(jìn)行測定；

所述的高效液相的色譜條件為：

色譜柱：反相色譜柱；

流動(dòng)相：流動(dòng)相A和流動(dòng)相B，所述的流動(dòng)相A包括乙腈；所述的流動(dòng)相B包括檸檬酸鹽緩沖液和四氫呋喃的混合液；和

流動(dòng)相洗脫：所述的流動(dòng)相洗脫為梯度洗脫，所述的梯度洗脫的順序?yàn)椋?/p>

其中，(v/v％)是指占流動(dòng)相的體積分?jǐn)?shù)，其中，0-25min時(shí)，流動(dòng)相A(v/v％)的體積分?jǐn)?shù)保持為1％，流動(dòng)相B的體積分?jǐn)?shù)保持為99％；25-30min時(shí)，流動(dòng)相A(v/v％)的體積分?jǐn)?shù)為從1％勻速上升到7％，流動(dòng)相B(v/v％)的體積分?jǐn)?shù)為從99％勻速下降到93％；30-56min時(shí)，流動(dòng)相A(v/v％)的體積分?jǐn)?shù)為從7％勻速下降到1％，流動(dòng)相B(v/v％)的體積分?jǐn)?shù)為從93％勻速上升到99％。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的方法為定量和/或定性方法。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的單糖包括葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、半乳糖、葡萄糖、阿拉伯糖、核糖、巖藻糖、鼠李糖和2-脫氧-D-核糖中的一種或多種。

4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述葡萄糖醛酸包括D-葡萄糖醛酸；

所述半乳糖醛酸包括D-半乳糖醛酸；

所述半乳糖包括D-半乳糖；

所述葡萄糖包括D-葡萄糖；

所述阿拉伯糖包括L-阿拉伯糖；

所述核糖包括D-核糖；

所述巖藻糖包括D-巖藻糖；和/或

所述鼠李糖包括L-鼠李糖。

5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的流動(dòng)相B中，檸檬酸鹽緩沖液與四氫呋喃體積比為(80-95)∶(5-20)，較佳地(85-93)∶(8-15)，更佳地(86-90)∶(10-14)，更佳地(87-89)∶(11-13)，最佳地88∶12。

6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的流動(dòng)相B中，檸檬酸鹽緩沖液的pH為3-7，較佳地4.0-6.0，更佳地4.5-5.5，更佳地4.8-5.2，最佳地5.0。

7.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的高效液相還具有選自下組的一種或多種色譜條件：

色譜柱溫度：25-35℃，較佳地28-32℃，更佳地30℃；和/或

流動(dòng)相(流動(dòng)相A+流動(dòng)相B)流速：0.2-3mL/min，較佳地0.5-1.5mL/min，更佳地0.6-1.0mL/min，最佳地0.8mL/min。

8.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的反相色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱。

9.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步驟(1)包括：先用衍生化試劑對樣品中的單糖進(jìn)行衍生化，得到含有衍生化的單糖的樣品后，然后進(jìn)樣HPLC，從而測定單糖。

10.如權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述的衍生化試劑包括0.1-4重量份氰基硼氫鈉、0.4-9重量份4-氨基苯甲酸乙酯、0.1-2重量份硼酸、2-15重量份醋酸和40-50重量份甲醇。