[發(fā)明專利]一種人源超氧化物歧化酶hSOD1突變體的制備及其應(yīng)用有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 202210095372.1 | 申請(qǐng)日: | 2022-01-26 |
| 公開(公告)號(hào): | CN114480445B | 公開(公告)日: | 2023-06-27 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人: | 黃新河;楊方瑤;簡甜甜;段嘉欣;劉汶東 | 申請(qǐng)(專利權(quán))人: | 西南交通大學(xué) |
| 主分類號(hào): | C12N15/53 | 分類號(hào): | C12N15/53;C12N15/70;C12N9/02;C12N1/21;A61K8/66;A61K38/44;A61P17/16;A61Q19/08;A23L33/00;C12R1/19 |
| 代理公司: | 成都信博專利代理有限責(zé)任公司 51200 | 代理人: | 卓仲陽 |
| 地址: | 610031 四川省*** | 國省代碼: | 四川;51 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | 一種 超氧化物歧化酶 hsod1 突變體 制備 及其 應(yīng)用 | ||
1.一種人源超氧化物歧化酶hSOD1突變體的基因,其特征在于,命名為Mt1SOD1,其核苷酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。
2.含有權(quán)利要求1所述基因的表達(dá)載體pET-28a-Mt1SOD1。
3.一種含有權(quán)利要求2所述載體pET-28a-Mt1SOD1的BL21(DE3)-pET28a-Mt1SOD1工程菌。
4.權(quán)利要求1所述基因編碼得到的重組Mt1SOD1突變體蛋白,其氨基酸序列如SEQ?IDNO.1所示。
5.一種重組人源超氧化物歧化酶hSOD1突變體Mt1SOD1的制備方法,其特征在于,所述突變體Mt1SOD1的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示,步驟如下:
(1)NCBI獲取序列,進(jìn)行密碼子優(yōu)化,5’端添加6×His-tag標(biāo)簽,化學(xué)合成5’端具有6×His-tag編碼序列的hSOD1、Mt1SOD1基因;
(2)測(cè)序驗(yàn)證;
(3)將hSOD1、Mt1SOD1基因片段克隆至pET-28a+質(zhì)粒;
(4)構(gòu)建pET-28a-Mt1SOD1表達(dá)質(zhì)粒;
(5)獲得BL21(DE3)-pET28a-SOD1目的基因工程菌;
(6)利用大腸桿菌BL21(DE3)進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),利用BL21(DE3)-pET28a-SOD1工程菌在25℃,1mMIPTG,800μMCu2+,20μMZn2+條件下誘導(dǎo)16h分別表達(dá)野生型hSOD1及突變型Mt1SOD1。
6.一種重組人源超氧化物歧化酶hSOD1突變體Mt1SOD1的應(yīng)用,所述突變體Mt1SOD1的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示,其特征在于,應(yīng)用于功能型抗衰化妝品的開發(fā)或應(yīng)用于其他抗衰產(chǎn)品的開發(fā)。
7.如權(quán)利要求6所述重組人源超氧化物歧化酶hSOD1突變體Mt1SOD1的應(yīng)用,其中所述其他抗衰產(chǎn)品是功能食品或抗衰藥品。
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