[發(fā)明專利]一種馬爾尼菲籃狀菌甘露聚糖蛋白及其在制備馬爾尼菲籃狀菌抗體檢測(cè)試劑盒中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210090101.7
• 申請(qǐng)日: 2022-01-26
• 公開（公告）號(hào): CN114106118B
• 公開（公告）日: 2022-04-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊光;彭潔;嚴(yán)俊;盛長忠;粟艷;周澤奇
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 丹娜（天津）生物科技股份有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/385
• 分類號(hào): C07K14/385;C07K1/22;C12N15/70;C12N15/31
• 代理公司: 天津合正知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12229
• 代理人: 王雨杰

1.一種檢測(cè)馬爾尼菲籃狀菌抗體的甘露聚糖蛋白，其特征在于：其氨基酸序列為SEQID No.1所示的氨基酸序列。

2.權(quán)利要求1所述的檢測(cè)馬爾尼菲籃狀菌抗體的甘露聚糖蛋白的制備方法，其特征在于：包括如下步驟：

(1)以含有甘露聚糖蛋白Mp1p編碼基因的質(zhì)粒為模板，采用定點(diǎn)突變方法，以突變引物為特異性擴(kuò)增引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得所述甘露聚糖蛋白的編碼基因；

(2)將步驟(1)獲得的編碼基因連接至經(jīng)Dpn1消化甲基化的模板質(zhì)粒，獲得重組表達(dá)質(zhì)粒；

(3)將步驟(2)的重組表達(dá)質(zhì)粒導(dǎo)入感受態(tài)細(xì)胞中，經(jīng)過卡那霉素抗性篩選后進(jìn)行培養(yǎng)發(fā)酵，發(fā)酵液經(jīng)過鎳柱純化獲得甘露聚糖蛋白。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測(cè)馬爾尼菲籃狀菌抗體的甘露聚糖蛋白的制備方法，其特征在于：所述步驟(1)的突變引物為：

F1: CGCACGAACTGGCGCCCATTAGCCGTCAACTG；

R1: CAGTTGACGGCTAATGGGCGCCAGTTCGTGCG；

F2: GTCAACTGAGCGATCAGATTGCGGCGGGTATTAAG；

R2：CTTAATACCCGCCGCAATCTGATCGCTCAGTTGAC。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測(cè)馬爾尼菲籃狀菌抗體的甘露聚糖蛋白的制備方法，其特征在于：

步驟（1）中的PCR反應(yīng)體系為：

質(zhì)粒模板1μL，突變引物混合物1μL，1×含Mg²⁺ Buffer 5μL，dNTP mix 5μL，DNAPolymerase 1μL，nuclease-free water 36μL，總體積為50μL；

PCR反應(yīng)條件為：

95℃預(yù)變性3min；95℃ 30sec，55℃ 30sec，68℃ 30sec，20個(gè)循環(huán)；68℃ 10min；4℃長時(shí)間保持。

5.一種標(biāo)記復(fù)合物，其特征在于：所述標(biāo)記復(fù)合物包括權(quán)利要求1所述的甘露聚糖蛋白和標(biāo)記物，所述標(biāo)記物包括但不限于下述中的任意一種：膠體金、熒光微球或HRP。

6.一種用于檢測(cè)馬爾尼菲籃狀菌抗體的試紙條，其特征在于：所述試紙條的原料包括下述中的任意一種或其組合：權(quán)利要求1所述的甘露聚糖蛋白、權(quán)利要求5所述的標(biāo)記復(fù)合物。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的試紙條，其特征在于：所述試紙條包括NC膜、吸水墊、熒光墊、樣品墊，所述熒光墊上包被有權(quán)利要求6所述的標(biāo)記復(fù)合物和標(biāo)記物標(biāo)記的雞IgY；所述NC膜上設(shè)有檢測(cè)線和質(zhì)控線，所述檢測(cè)線上包被有濃度為1mg/mL的權(quán)利要求1所述的甘露聚糖蛋白，所述質(zhì)控線處包被有濃度為1mg/mL的羊抗雞IgY抗體。

8.一種用于檢測(cè)馬爾尼菲籃狀菌抗體的檢測(cè)試劑，其特征在于：所述檢測(cè)試劑包括權(quán)利要求1所述的甘露聚糖蛋白、權(quán)利要求5所述的標(biāo)記復(fù)合物、權(quán)利要求6或7所述的試紙條中一種或幾種。

9.一種用于檢測(cè)馬爾尼菲籃狀菌抗體的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒中包括權(quán)利要求1所述的甘露聚糖蛋白、權(quán)利要求5所述的標(biāo)記復(fù)合物、權(quán)利要求6或7所述的試紙條中一種或幾種。