[發(fā)明專利]與綠豆抗枯萎病主效QTL位點(diǎn)Fov2-1緊密連鎖的分子標(biāo)記及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210089499.2
• 申請(qǐng)日: 2022-01-25
• 公開（公告）號(hào): CN114292953B
• 公開（公告）日: 2023-04-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王彥;田靜;張志肖;范保杰;劉長(zhǎng)友;曹志敏;王珅;蘇秋竹
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河北省農(nóng)林科學(xué)院糧油作物研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12N15/11;A01H1/04;A01H1/02
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11139
• 代理人: 馬鑫

1.與綠豆抗枯萎病主效QTL位點(diǎn)緊密連鎖的SSR分子標(biāo)記，其特征在于，所述的綠豆抗枯萎病主效QTL位點(diǎn)命名為Fov2-1，位于第2連鎖群Mchr4-94~Mchr4-32的標(biāo)記區(qū)間內(nèi)，所述的與綠豆抗枯萎病主效QTL位點(diǎn)緊密連鎖的SSR分子標(biāo)記為Mchr4-94與Mchr4-32的組合，其中SSR分子標(biāo)記Mchr4-94由引物Mchr4-94F和引物Mchr4-94R以綠豆基因組DNA為模板通過PCR擴(kuò)增得到，SSR分子標(biāo)記Mchr4-32由引物Mchr4-32F和引物Mchr4-32R以綠豆基因組DNA為模板通過PCR擴(kuò)增得到，所述的引物序列如下：

Mchr4-94F：ACGTGTAATCTGCTGTGGAT；

Mchr4-94R：CTCAGATTGAATTTGCCTTC；及

Mchr4-32F：CGGAATTATCACCAACTCAT；

Mchr4-32R：TGAAGATCACCAGAGGATTT。

2.權(quán)利要求1所述的與綠豆抗枯萎病主效QTL位點(diǎn)緊密連鎖的SSR分子標(biāo)記在“濰綠9002-341”和“V1128”雜交分離群體抗枯萎病分子標(biāo)記輔助選擇育種中的應(yīng)用。

3.獲得權(quán)利要求1所述的與綠豆抗枯萎病主效QTL位點(diǎn)緊密連鎖的SSR分子標(biāo)記的引物對(duì)在“濰綠9002-341”和“V1128”雜交分離群體抗枯萎病分子標(biāo)記輔助選擇育種中的應(yīng)用，所述的引物對(duì)為Mchr4-94F/R與Mchr4-32F/R的組合，引物序列如下所示：

Mchr4-94F：ACGTGTAATCTGCTGTGGAT；

Mchr4-94R：CTCAGATTGAATTTGCCTTC；?及

Mchr4-32F：CGGAATTATCACCAACTCAT；

Mchr4-32R：TGAAGATCACCAGAGGATTT。

4.一種獲得抗枯萎病綠豆新品種的方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）以感枯萎病的綠豆資源V1128為母本，抗枯萎病品種濰綠9002-341為父本，雜交獲得F₁代，F(xiàn)₁自交，獲得F_2:3分離群體；

（2）采集兩親本及F_2:3分離群體每個(gè)株系幼嫩的三出復(fù)葉置于2.0ml離心管內(nèi)，利用CTAB法提取所有樣本基因組DNA，并利用0.8%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA質(zhì)量，備用；

（3）分別以提取得到的樣本基因組DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，以獲得與綠豆抗枯萎病主效QTL位點(diǎn)Fov2-1緊密連鎖的SSR分子標(biāo)記，所使用的引物為Mchr4-94F/R與Mchr4-32F/R的組合，引物序列如下所示：

Mchr4-94F：ACGTGTAATCTGCTGTGGAT

Mchr4-94R：CTCAGATTGAATTTGCCTTC

Mchr4-32F：CGGAATTATCACCAACTCAT

Mchr4-32R：TGAAGATCACCAGAGGATTT

（4）根據(jù)擴(kuò)增的結(jié)果判斷每個(gè)株系的抗病情況，若擴(kuò)增結(jié)果與母本相同，則抗枯萎表型鑒定結(jié)果為高感；若擴(kuò)增結(jié)果與父本相同，則抗枯萎表型鑒定結(jié)果為抗或高抗；若擴(kuò)增結(jié)果表現(xiàn)為雜合型，抗枯萎表型鑒定結(jié)果為中抗或感。