[發(fā)明專利]與綠豆抗枯萎病主效QTL位點(diǎn)Fov2-1緊密連鎖的分子標(biāo)記及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210089499.2
• 申請(qǐng)日: 2022-01-25
• 公開（公告）號(hào): CN114292953B
• 公開（公告）日: 2023-04-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王彥;田靜;張志肖;范保杰;劉長友;曹志敏;王珅;蘇秋竹
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河北省農(nóng)林科學(xué)院糧油作物研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12N15/11;A01H1/04;A01H1/02
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11139
• 代理人: 馬鑫

本發(fā)明公開了一種與綠豆抗枯萎病主效QTL位點(diǎn)Fov2?1緊密連鎖的分子標(biāo)記及應(yīng)用，屬于綠豆分子育種技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明以“濰綠9002?341”和“V1128”形成F_2:3分離群體為試驗(yàn)材料，利用SSR標(biāo)記構(gòu)建遺傳連鎖圖譜，并結(jié)合綠豆抗枯萎病F_2:3分離群體表型鑒定結(jié)果在遺傳連鎖圖的第2連鎖群檢測到主效QTL位點(diǎn)Fov2?1，與該主效QTL位點(diǎn)緊密連鎖的SSR標(biāo)記為Mchr4?94和Mchr4?32，標(biāo)記之間的遺傳距離為1.89cM，LOD為7.45，表型貢獻(xiàn)率為61.01％，加性效應(yīng)為?21.28。本發(fā)明所獲得的與綠豆抗枯萎病主效QTL位點(diǎn)Fov2?1緊密連鎖的分子標(biāo)記可用于綠豆抗枯萎病早期選擇，對(duì)于提高抗枯萎病綠豆的育種效率具有重要意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種與綠豆抗枯萎病主效QTL位點(diǎn)緊密連鎖的分子標(biāo)記及應(yīng)用。本發(fā)明屬于綠豆分子育種技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

綠豆枯萎病是主要的土傳病害，嚴(yán)重發(fā)生時(shí)會(huì)導(dǎo)致巨大的經(jīng)濟(jì)損失。防治枯萎病最經(jīng)濟(jì)有效的方法就是培育和種植抗病品種，而定位抗性基因是培養(yǎng)抗病品種的基礎(chǔ)。Yu等通過“B2”與“835”雜交獲得的包含354個(gè)株系的F₂分離群體構(gòu)建遺傳圖譜，并將在連鎖群3(即5號(hào)染色體)上檢測到的與蘿卜抗枯萎病相關(guān)的Fwr1基因精細(xì)定位于5號(hào)染色體標(biāo)記FM82和FM87區(qū)間內(nèi)，標(biāo)記間距離為139.8kb。Branham等通過抗性甜瓜親本USVL246-FR2和USVL114雜交獲得的分離群體(F_2:3和重組自交系)在9號(hào)染色體上定位到1個(gè)主效QTL位點(diǎn)。Abdelraheem等利用棉花SNP63K芯片進(jìn)行全基因組關(guān)聯(lián)分析定位到13個(gè)與棉花抗枯萎4號(hào)生理小種相關(guān)的QTL位點(diǎn)。李娜等以高抗枯萎病的栽培西瓜‘ZXG01478’和高感病的栽培西瓜‘14CB11’為親本構(gòu)建的F₂群體為試驗(yàn)材料，檢測到1個(gè)枯萎病抗性相關(guān)的主效QTL(fon1)。

目前，國內(nèi)外關(guān)于食用豆抗枯萎病的QTL研究未見報(bào)道。本發(fā)明以抗豆象、感枯萎病的綠豆資源V1128和抗枯萎病品種濰綠9002-341為親本本構(gòu)建的F_2:3分離群體為試驗(yàn)材料，進(jìn)行綠豆遺傳連鎖圖譜構(gòu)建和抗枯萎病QTL定位，為綠豆抗枯萎病分子標(biāo)記輔助育種和基因克隆提供依據(jù)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的缺點(diǎn)，通過構(gòu)建綠豆遺傳連鎖圖譜，篩選出1個(gè)抗枯萎病QTL位點(diǎn)以及與其緊密連鎖的2個(gè)SSR標(biāo)記，該位點(diǎn)的效應(yīng)值較高，可應(yīng)用于綠豆抗枯萎病分子標(biāo)記輔助育種技術(shù)中。

為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用的主要技術(shù)方案包括：

本發(fā)明提出的一種與綠豆抗枯萎病主效QTL位點(diǎn)緊密連鎖的SSR分子標(biāo)記，所述的綠豆抗枯萎病主效QTL位點(diǎn)命名為Fov2-1，位于第2連鎖群Mchr4-94～Mchr4-32的標(biāo)記區(qū)間內(nèi)，與綠豆抗枯萎病主效QTL位點(diǎn)Fov2-1緊密連鎖的SSR分子標(biāo)記為Mchr4-94、Mchr4-32或其組合，其中SSR分子標(biāo)記Mchr4-94由引物Mchr4-94F和引物Mchr4-94R以綠豆基因組DNA為模板通過PCR擴(kuò)增得到，SSR分子標(biāo)記Mchr4-32由引物Mchr4-32F和引物Mchr4-32R以綠豆基因組DNA為模板通過PCR擴(kuò)增得到，所述的引物序列如下：

Mchr4-94F：ACGTGTAATCTGCTGTGGAT；

Mchr4-94R：CTCAGATTGAATTTGCCTTC；及/或

Mchr4-32F：CGGAATTATCACCAACTCAT；

Mchr4-32R：TGAAGATCACCAGAGGATTT。

進(jìn)一步的，本發(fā)明還提出了一種引物對(duì)，其為獲得所述的與綠豆抗枯萎病主效QTL位點(diǎn)緊密連鎖的SSR分子標(biāo)記的引物對(duì)；所述的引物對(duì)為Mchr4-94F/R、Mchr4-32F/R或其組合，引物序列如下所示：