[發明專利]斑石鯛雌雄遺傳性別的特異性標記及鑒定方法和試劑盒

有效

• 申請號: 202210088031.1
• 申請日: 2022-01-26
• 公開（公告）號: CN114107522B
• 公開（公告）日: 2022-05-06
• 發明（設計）人: 肖永雙;馬玉婷;李軍;肖志忠;吳燕鐸;趙海霞;馬道遠
• 申請（專利權）人: 中國科學院海洋研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6879;C12N15/11
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 李穎

本發明涉及分子生物學技術對物種種質鑒定的定性檢測方法，具體說是斑石鯛雌雄遺傳性別的特異性標記及鑒定方法和試劑盒。斑石鯛雌魚與雄魚染色體的特異性標記的核苷酸序列為SEQ ID NO:1（Xfm ID Nm:1）和SEQ ID NO:2（Ym ID Nm:1）所示堿基。該方法利用一對引物在遺傳雄性個體中擴增出635bp和925bp兩個相差290bp的DNA片段，在遺傳雌性個體中僅擴增出635bp的單一DNA片段，并可以通過瓊脂糖凝膠電泳分辨，縮短了準確鑒定斑石鯛遺傳性別的時間，提升了性別檢測效率。在斑石鯛性別鑒定、高雄苗種制備和家系選育上具有重要的意義和應用價值。

技術領域

本發明涉及分子生物學技術對物種種質鑒定的定性檢測方法，具體說是斑石鯛雌雄遺傳性別的特異性標記及鑒定方法和試劑盒。

背景技術

斑石鯛隸屬于鱸形目（Perciformes），石鯛科（Oplegnathidae），石鯛屬（Oplegnathus），主要分布于西太平洋溫熱帶海域，喜棲息于10-100m水深的巖礁、砂礫、貝藻叢生的海區，為戀礁性底棲魚類；幼魚具有在夏、秋季隨著海藻漂移生態習性。肉食性，齒銳利，可咬碎貝類或海膽等堅硬的外殼（孟慶聞等，1995）。斑石鯛皮下含有豐富的膠原蛋白、多種氨基酸及不飽和脂肪酸，口感獨特，在日本料理中具有“刺身絕品”之譽；另外，斑石鯛體態優美，魚身光澤銀紋與黑褐色斑點結合，被人們稱之為“夢幻之魚”，受垂釣愛好者及消費者的青睞，是一種具有較高食用和觀賞價值的海產魚類（高小強等，2018）。目前人工繁育的斑石鯛市場銷售價格達到了200元/斤，同時由于斑石鯛具有攝食貝殼食性特點，可以清理養殖網箱網衣，節約了人力資源和網衣清理成本，經濟效益和生態效益極其顯著。斑石鯛又是我國本土自然種類，其資源開發及可持續利用具長效性，養殖前景廣闊。

斑石鯛雌魚染色體核型為2n=48，含有46條端著絲粒染色體和1對亞中部著絲粒染色體，遺傳性別類型為（X₁X₁X₂X₂）；雄魚染色體核型為2n=47，含有44條端著絲粒染色體和1對亞中部著絲粒染色體以及1條巨大的異形染色體，遺傳性別類型為（X₁X₂Y）（薛蕊等，2016）。石鯛科魚類在養殖過程中存在顯著的雌雄生長二態性，雄魚生長速度快于雌魚，斑石鯛高雄苗種和全雄苗種的制備將促進斑石鯛養殖產業的提質增效，開展斑石鯛苗種遺傳性別快速鑒定技術的研發將有助于斑石鯛優良雄性種質的儲備（肖志忠，2015）。由于斑石鯛生殖周期較長（3~4年），在幼魚和成魚時期無法通過外部形態特征對斑石鯛性別進行準確鑒定，而在斑石鯛人工繁育和人工選育構建家系過程中都需要選擇優質雌雄親魚并實現性別的精確鑒定，因此，建立斑石鯛雌、雄遺傳性別快速鑒定方法是實現斑石鯛高雄苗種制備，提升斑石鯛遺傳育種進程和優質苗種規模化生產的重要手段。

目前已報道的斑石鯛雌、雄遺傳性別的鑒定采用的是“三體法”即三條引物聯合擴增分析，由于該方法采用的三條引物的退火溫度不同，造成目的條帶擴增效率不一致、擴增產物不穩定；同時該方法設計的遺傳雄性個體特異性目的條帶大小為222個堿基（bp），極易同PCR擴增過程中的產生引物二聚體（10~250bp）混淆；另外由于該方法中雄性個體另外兩條目的條帶僅相差12個堿基（bp），導致在常規瓊脂糖凝膠電泳上兩條目的帶的區分度差。因此，挖掘斑石鯛新的遺傳性別特異分子標記，建立斑石鯛雌雄遺傳性別高效、快捷鑒定的分子技術成為斑石鯛人工選育和養殖產業亟待解決的技術難題。

發明內容

本發明的目的在于一種斑石鯛雌雄遺傳性別的特異性標記及其快速鑒定的方法。

為實現上述目的，本發明采用技術方案為：

一種斑石鯛雌雄遺傳性別的特異性標記，斑石鯛雌魚與雄魚染色體的特異性標記的核苷酸序列為SEQ ID NO:1（Xfm ID Nm:1）和SEQ ID NO:2（Ym ID Nm:1）所示堿基。