[發明專利]特異性結合β-銀環蛇毒素的單克隆抗體及其應用

有效

• 申請號: 202210086551.9
• 申請日: 2022-01-25
• 公開（公告）號: CN114560934B
• 公開（公告）日: 2022-12-23
• 發明（設計）人: 張靖;莫冬冬;王福;高宏;王德鴻;魏穎;楊衛麗;應天翼;李巖松;余濤
• 申請（專利權）人: 北京弘進久安生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C12N15/13;G01N33/543;G01N33/558;G01N33/68
• 代理公司: 北京睿陽聯合知識產權代理有限公司 11758
• 代理人: 王瑩;張穎

本發明公開了特異性結合β?銀環蛇毒素的抗體或其活性片段、檢測β?銀環蛇毒素的試劑盒及其應用。本發明的檢測方法簡便、快速，無需特殊儀器設備即可檢測，實用經濟，極適用于快速定性檢測樣本中的β?BGT。這在蛇毒抗原的檢測、蛇咬傷中毒的預防及救治等方面具有重要意義。

技術領域

本發明涉及基因工程免疫技術領域，具體的涉及β銀環蛇神經毒素單克隆抗體的制備，以及編碼所述抗體的核酸。還涉及一種以膠體金免疫層析法快速檢測β-銀環蛇毒素檢測試劑盒及其制備方法。

背景技術

銀環蛇(Bungarus multicinctus)是眼鏡蛇科環蛇屬的一種動物，是分布于中國、緬甸、老撾、越南北部和泰國等地區最毒的蛇。全身背面是黑白相間的環紋，具30～50個白色或乳黃色窄橫紋。銀環蛇一次可排毒4.6mg，而1mg的干毒即可致命。銀環蛇毒素(Bungarotoxin)的主要成分為蛋白質和多肽，包括α-銀環蛇毒素(α-BGT)、β-銀環蛇毒素(β-BGT)、κ-銀環蛇毒素(κ-BGT)、γ-銀環蛇毒素(γ-BGT)和磷脂酶A等酶類。其中，主要用于醫學藥理學和分子免疫學，制備單克隆抗體的是β-銀環蛇毒素。β-銀環蛇毒素是一種高堿性多肽，其分子量為20～22KD，由A、B兩條鏈構成。A鏈具有磷脂酶A₂的活性，在結構上與哺乳動物胰腺分泌的磷脂酶A₂及其它蛇毒液中的磷脂酶A₂具有同源性。B鏈是β-BGT對特定靶向細胞膜的識別亞基，在神經-肌肉接頭突觸前膜中的一些成分間相互作用上有著重要的功能。

β-銀環蛇毒素的毒性強，致命性強。因此，亟需建立一種快速便捷、靈敏度高及特異性好的檢測β-銀環蛇毒素的方法，為β-銀環蛇毒素中毒的治療以及緊急預防奠定基礎。

發明內容

本發明的第一個目的是提供特異性結合β-銀環蛇毒素的抗體及其活性片段。

具體而言，本發明提供的抗體或活性片段包含至少一個重鏈可變區和至少一個輕鏈可變區，其中：

所述重鏈可變區具有SEQ ID NO:3所示的CDR1，SEQ ID NO:4所示的CDR2和/或SEQID NO:5所示的CDR3；或者，所述重鏈可變區具有SEQ ID NO:13所示的CDR1，SEQ ID NO:14所示的CDR2和/或SEQ ID NO:15所示的CDR3；

所述輕鏈可變區具有SEQ ID NO:8所示的CDR1，SEQ ID NO:9所示的CDR2和/或SEQID NO:10所示的CDR3；或者，所述輕鏈可變區具有SEQ ID NO:18所示的CDR1，SEQ ID NO:19所示的CDR2和/或SEQ ID NO:20所示的CDR3。

作為本發明的一種優選方案，所述抗體中，所述重鏈可變區具有SEQ ID NO:3所示的CDR1，SEQ ID NO:4所示的CDR2和/或SEQ ID NO:5所示的CDR3；所述輕鏈可變區具有SEQID NO:8所示的CDR1，SEQ ID NO:9所示的CDR2和/或SEQ ID NO:10所示的CDR3。

作為本發明的一種優選方案，所述抗體中，所述重鏈可變區具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，或SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列經過一個或多個氨基酸添加、刪除、替換或修飾獲得的保守性變異體；所述輕鏈可變區具有SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，或SEQID NO:6所示的氨基酸序列經一個或多個氨基酸添加、刪除、替換或修飾獲得的保守性變異體。

作為本發明的一種優選方案，所述抗體中，所述重鏈可變區具有SEQ ID NO:13所示的CDR1，SEQ ID NO:14所示的CDR2和/或SEQ ID NO:15所示的CDR3；所述輕鏈可變區具有SEQ ID NO:18所示的CDR1，SEQ ID NO:19所示的CDR2和/或SEQ ID NO:20所示的CDR3。