[發明專利]DPH6基因在制備具有毒素抗性細胞系中的應用

有效

• 申請號: 202210085844.5
• 申請日: 2022-01-25
• 公開（公告）號: CN114410680B
• 公開（公告）日: 2023-03-31
• 發明（設計）人: 梅峰
• 申請（專利權）人: 乾元康安（蘇州）生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/65;C12N15/55;C12N9/22;C12N15/113;C12N15/31;C12N5/10;C12R1/91
• 代理公司: 北京預立生科知識產權代理有限公司 11736
• 代理人: 朱萍

1.一種制備具有毒素抗性細胞系或提高細胞系的毒素耐受性的方法，其特征在于，所述方法包括利用CRISPR/Cas9系統抑制DPH6基因表達；所述CRISPR/Cas9系統中使用的靶向DPH6的gRNA序列選自以下組：

1）SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2；

2）SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4；

3）SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8；

4）SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10；

5）SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述毒素是ADP-核糖基化毒素。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述毒素是DTA或PE。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述細胞系是哺乳動物細胞。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述哺乳動物細胞系是正常的非癌細胞。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述哺乳動物細胞是HEK293或CHO細胞。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于， HEK293是freestyle 293F。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括將編碼Cas9蛋白的核酸序列以及編碼靶向DPH6的gRNA的核酸序列導入所選細胞中。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述方法包括將包含編碼Cas9蛋白的核酸序列的第一表達載體以及包含編碼靶向DPH6的gRNA的核酸序列的第二表達載體導入所選細胞中。

10.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述方法包括將同時包含編碼Cas9蛋白的核酸序列和編碼靶向DPH6的gRNA的核酸序列的表達載體導入所選細胞中。

11.一種生產毒素的方法，其特征在于，所述生產毒素的方法包括將表達毒素的核酸分子導入利用權利要求1-10中任一項所述的方法制備的具有毒素抗性的細胞系中。

12.根據權利要求11所述的方法，其特征在于，所述毒素是蛋白質毒素。

13.根據權利要求12所述的方法，其特征在于，所述毒素是DTA或PE。

14.一種生產毒素偶聯蛋白的方法，所述生產毒素偶聯蛋白的方法包括將表達毒素偶聯蛋白的核酸分子導入利用權利要求1-10中任一項所述的方法制備的具有毒素抗性的細胞系中。

15.根據權利要求14所述的方法，其特征在于，所述毒素偶聯蛋白包括抗體偶聯藥物、毒素融合蛋白。

16.根據權利要求14所述的方法，其特征在于，所述毒素是蛋白質毒素。

17.根據權利要求16所述的方法，其特征在于，所述毒素是DTA或PE。

18.一種gRNA，所述gRNA的序列選自以下組：

1）SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2；

2）SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4；

3）SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8；

4）SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10；

5）SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12。