[發明專利]轉基因玉米BFL4-2轉化體特異性實時熒光定量PCR檢測引物、檢測方法

在審

• 申請號: 202210085433.6
• 申請日: 2022-01-25
• 公開（公告）號: CN114410822A
• 公開（公告）日: 2022-04-29
• 發明（設計）人: 苗朝華;金蕪軍;劉衛曉;宛煜嵩;董美;高進;黃衛紅;王迪;文婷婷;孟麗霞
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院生物技術研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京知匯林知識產權代理事務所(普通合伙) 11794
• 代理人: 董濤

1.一種轉基因玉米BFL4-2轉化體特異性定量PCR檢測引物，其特征在于，所述特異性檢測正向引物為：BFL4-2-qF，其核苷酸序列如序列表SEQ ID No.1所示；反向引物為：BFL4-2-qR，其核苷酸序列如序列表SEQ ID No.2所示。

2.根據權利要求1所述的轉基因玉米BFL4-2轉化體特異性定量PCR檢測引物，與其匹配的探針為：BFL4-2-P，探針序列如序列表SEQ ID No.3所示。

3.一種轉基因玉米BFL4-2轉化體特異性的定量檢測方法，其特征在于，按照如下步驟進行：

(1)提取待測樣品DNA；

(2)以提取的水稻樣品的DNA為模板，同時設置玉米內標準基因和轉基因玉米BFL4-2轉化體特異性實時熒光定量PCR反應體系，對標準梯度樣品和待測樣品進行檢測；

(3)運行實時熒光定量PCR反應，若待測樣品中轉化體特異性實時熒光PCR反應體系沒有擴增信號出現，則證明待測樣品中不含有轉基因玉米BFL4-2品系；

(4)若轉化體特異性實時熒光PCR反應體系擴增出熒光信號，則證明樣品中含有轉基因玉米BFL4-2，根據標準梯度樣品讀取的熒光PCR反應的Ct值，以Ct值為Y軸，基因組DNA拷貝數的對數為X軸，繪制標準曲線Ct＝k×Lg(Copies)+b，分別得到一條外源基因標準曲線方程和一條內標準基因標準曲線方程，再將待測樣品的Ct值帶入方程即得到了外源基因和內標準基因的拷貝數，然后按下述公式計算轉基因含量：樣品中轉基因玉米BFL4-2的含量％＝外源基因拷貝數/內標準基因拷貝數×100。

4.根據權利要求3所述的轉基因玉米BFL4-2轉化體特異性定量檢測方法，其特征在于，所述BFL4-2水稻轉化體特異性實時熒光PCR反應體系為：無菌水8μL，2×TaqMan反應緩沖液12.5μL，10μmol/L BFL4-2-qF1μL，10μmol/L BFL4-2-qR1μL，10μmol/L BFL4-2-P0.5μL，DNA模板2μL。

5.根據權利要求3所述的轉基因玉米BFL4-2轉化體特異性定量檢測方法，其特征在于，所述實時熒光PCR反應的條件為：95℃，5min；95℃，15s，60℃，60s，40個循環。