[發(fā)明專利]一種發(fā)酵生產(chǎn)尼莫克汀的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210080434.1
• 申請日: 2022-01-24
• 公開（公告）號: CN114525315A
• 公開（公告）日: 2022-05-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉聰潔;王雪峰
• 申請（專利權(quán)）人: 河北圣雪大成制藥有限責(zé)任公司
• 主分類號: C12P17/18
• 分類號: C12P17/18;C12N1/20;C12R1/465
• 代理公司: 石家莊君聯(lián)專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 13125
• 代理人: 張柳云

本發(fā)明公開了一種發(fā)酵生產(chǎn)尼莫克汀的方法，屬于微生物發(fā)酵技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明通過優(yōu)化包括斜面培養(yǎng)基、種子培養(yǎng)和發(fā)酵培養(yǎng)基在內(nèi)的組合培養(yǎng)基及其工藝條件，提高了尼莫克汀的發(fā)酵單位，且工藝簡單、易于實(shí)施，適合工業(yè)化生產(chǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物發(fā)酵技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種發(fā)酵生產(chǎn)尼莫克汀的方法。

背景技術(shù)

化學(xué)農(nóng)藥制造業(yè)屬于重污染行業(yè)之一，隨著全社會環(huán)境保護(hù)和食品安全意識的不斷增強(qiáng)，高毒化學(xué)農(nóng)藥逐步退出市場，而生物農(nóng)藥因其毒副作用小、對環(huán)境友好等特點(diǎn)，日益受到重視。

尼莫克汀(Nemadectin)是由藍(lán)灰鏈霉菌(Streptomyces cyaneogriseus)發(fā)酵生產(chǎn)的一種大環(huán)內(nèi)酯類化合物，屬于米爾貝霉素(Milbemycin)家族抗生素。以尼莫克汀為原料經(jīng)過化學(xué)合成，可以得到價值更高的新型抗寄生蟲藥莫西菌素(Moxidectin)。與傳統(tǒng)的化學(xué)農(nóng)藥相比，它們具有高效、低毒、高選擇性以及與環(huán)境相容性高的特點(diǎn)，且由于本身的親脂特性強(qiáng)，較阿維菌素、米爾貝霉素等有著更高的安全性。目前，國內(nèi)對尼莫克汀的研究尚處于起步階段，關(guān)于尼莫克汀的菌種選育、發(fā)酵工藝等方面的研究較少，生產(chǎn)水平不高。鑒于此，本發(fā)明開發(fā)了一種發(fā)酵生產(chǎn)尼莫克汀的方法。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決尼莫克汀發(fā)酵單位偏低的問題，本發(fā)明提供了一種發(fā)酵生產(chǎn)尼莫克汀的方法。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

一種發(fā)酵生產(chǎn)尼莫克汀的方法，所述方法包括以下步驟：

(1)斜面培養(yǎng)：將保存的尼莫克汀生產(chǎn)菌株接種于斜面培養(yǎng)基上，25-30℃，20％-60％濕度條件下培養(yǎng)6-9天，得到成熟的斜面孢子；

(2)種子培養(yǎng)：將步驟(1)中得到的成熟的斜面孢子接種到種子培養(yǎng)基，25-30℃，20％-60％濕度條件，200-240rpm，培養(yǎng)24-36h，得到成熟的種子液；

(3)發(fā)酵培養(yǎng)：將步驟(2)中得到的成熟的種子液按照5-10％接種量接種至發(fā)酵培養(yǎng)基，25-30℃，20％-60％濕度條件，200-240rpm，培養(yǎng)6-12天，得到含有尼莫克汀的發(fā)酵液。

優(yōu)選的，所述的斜面培養(yǎng)基的各成分的重量百分比為：葡萄糖0.1-0.4％，麥芽糖0.05-0.2％，酵母粉0.2-0.5％，玉米淀粉0.3-0.6％，低溫豆粉0.3-0.6％，硝酸鉀0.05-0.2％，磷酸氫二鉀0.05-0.1％，氯化鈉0.05-0.1％，硫酸鎂0.01-0.03％，硫酸亞鐵0.01-0.03％，碳酸鈣0.01-0.03％，瓊脂1.8-2.2％，使用純化水配制，用20％的NaOH調(diào)節(jié)pH至6.8-7.0。

優(yōu)選的，所述的斜面培養(yǎng)基的各成分的重量百分比為：葡萄糖0.3％，麥芽糖0.1％，酵母粉0.4％，玉米淀粉0.5％，低溫豆粉0.5％，硝酸鉀0.1％，磷酸氫二鉀0.05％，氯化鈉0.05％，硫酸鎂0.03％，硫酸亞鐵0.01％，碳酸鈣0.01％，瓊脂2.0％。使用純化水配制，用20％的NaOH調(diào)節(jié)pH至6.8-7.0。

優(yōu)選的，所述的種子培養(yǎng)基的各成分的重量百分比為：葡萄糖0.5-1.5％，玉米糊精0.5-1.5％，玉米淀粉0.5-2.0％，高溫豆粉1.0-2.0％，棉籽餅粉0.3-1.0％，酵母粉0.5-1.0％，氯化鈉0.05-0.1％，硫酸鎂0.05-0.1％，磷酸氫二鉀0.05-0.2％，玉米油為體積百分比的0.3-1.0％，使用自來水配制，用20％的NaOH調(diào)節(jié)pH至7.0-7.2。

優(yōu)選的，所述的種子培養(yǎng)基的各成分的重量百分比為：葡萄糖1.0％，玉米糊精1.0％，玉米淀粉1.0％，高溫豆粉1.5％，棉籽餅粉0.6％，酵母粉1.0％，氯化鈉0.05％，硫酸鎂0.1％，磷酸氫二鉀0.1％，玉米油為體積百分比的0.5％，使用自來水配制，用20％的NaOH調(diào)節(jié)pH至7.0-7.2。