[發(fā)明專利]一株產(chǎn)布雷菲德菌素A的毛黃堇內(nèi)生真菌及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210079844.4
• 申請日: 2022-01-24
• 公開（公告）號: CN114874915B
• 公開（公告）日: 2023-06-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 明乾良;高寧;李雨濃;李鵬;黃秀凝
• 申請（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P17/08;C12R1/645
• 代理公司: 重慶聚為捷知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 50297
• 代理人: 李闖

本發(fā)明公開了一株產(chǎn)布雷菲德菌素A(brefeldin?A，BFA)的毛黃堇內(nèi)生真菌，它是從罌粟科紫堇屬植物毛黃堇(Corydalis?tomentellaFranch.)植物活體中采用內(nèi)生真菌分離純化技術(shù)分離獲得的，經(jīng)微生物分類學鑒定為Dactylonectria?alcacerensis?CT?6。該菌株保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏日期為2021年10月20日，保藏編號為CGMCC?No.23290。本發(fā)明應(yīng)用毛黃堇內(nèi)生真菌菌株Dactylonectria?alcacerensis?CT?6大米培養(yǎng)基固體發(fā)酵產(chǎn)生了BFA，是尋找BFA新資源的重要微生物。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及微生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一株產(chǎn)布雷菲德菌素A的毛黃堇內(nèi)生真菌及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

植物內(nèi)生真菌是指存在于健康植物根莖葉等組織部位內(nèi)部，不會對宿主植物造成明顯傷害或者引起宿主植物組織明顯病癥的真菌。植物內(nèi)生真菌能夠產(chǎn)生很多結(jié)構(gòu)多樣且具有廣泛生物活性的次生代謝產(chǎn)物。因此，植物內(nèi)生真菌已成為尋找活性天然產(chǎn)物的重要來源，能夠為新藥研發(fā)提供更多的先導化合物或候選藥物。

BFA是一種天然的大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，能有效抑制蛋白質(zhì)由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)向高爾基體的轉(zhuǎn)運過程，是一種廣泛應(yīng)用于哺乳動物信號傳導研究的分子工具。最早由Singleton等從Penicillium?decumben發(fā)酵液中分離得到。BFA具有抗真菌、抗病毒、抗有絲分裂、抗腫瘤等生物學活性，BFA及其衍生物是重要的抗腫瘤候選藥。

目前，已有報道青霉屬(Penicillium)、殼二孢屬(Ascochyta)、棒曲霉(Aspergillus)、分支孢屬(Cladosporium)、鏈格孢菌屬(Alternaria)、擬青霉(Paecilomyces)、莖點霉屬(Phoma)、踝節(jié)菌屬(Talaromyces)、布雷正青霉屬(Eupenicillium)、曲霉屬(Aspergillus)等真菌均能產(chǎn)生BFA。但目前報道的微生物發(fā)酵產(chǎn)生BFA的產(chǎn)量較低。

發(fā)明內(nèi)容

1.要解決的技術(shù)問題

本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有技術(shù)中目前報道的微生物發(fā)酵產(chǎn)生BFA產(chǎn)量較低的問題，而提出的一株產(chǎn)布雷菲德菌素A的毛黃堇內(nèi)生真菌及其應(yīng)用。

2.技術(shù)方案

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用了如下技術(shù)方案：

一株產(chǎn)布雷菲德菌素A的毛黃堇內(nèi)生真菌，其命名為Dactylonectriaalcacerensis?CT-6，該菌株保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏日期為2021年10月20日，保藏編號為CGMCC?No.23290。

本發(fā)明還提供了一種毛黃堇內(nèi)生真菌Dactylonectria?alcacerensis?CT-6的應(yīng)用，利用所述的毛黃堇內(nèi)生真菌制備BFA。

本發(fā)明還提供了一種毛黃堇內(nèi)生真菌Dactylonectria?alcacerensis?CT-6制備BFA的方法，該制備方法包括下列步驟：

1)取本發(fā)明的毛黃堇內(nèi)生真菌菌種，在無菌條件下，用接種針挑取少量菌絲，接入已滅菌的固體PDA培養(yǎng)基試管，活化培養(yǎng)7天。

2)取活化培養(yǎng)后的菌種，在無菌條件下，轉(zhuǎn)接入已滅菌的液體培PDA種子培養(yǎng)基中，培養(yǎng)5天，得種子。

3)配制好的大米培養(yǎng)基121℃滅菌處理30分鐘，冷卻備用。無菌條件下，按照50ml/瓶的接種量接種入種子液，并用鑷子攪拌大米培養(yǎng)基使種子液與其充分混勻，室溫放置培養(yǎng)40天。

4)將上述培養(yǎng)物每瓶加入300ml乙酸乙酯超聲提取1小時，重復3次，合并濃縮乙酸乙酯提取液得乙酸乙酯粗提物。