[發明專利]一株產布雷菲德菌素A的毛黃堇內生真菌及其應用有效
| 申請號： | 202210079844.4 | 申請日： | 2022-01-24 |
| 公開（公告）號： | CN114874915B | 公開（公告）日： | 2023-06-23 |
| 發明（設計）人： | 明乾良;高寧;李雨濃;李鵬;黃秀凝 | 申請（專利權）人： | 中國人民解放軍陸軍軍醫大學 |
| 主分類號： | C12N1/14 | 分類號： | C12N1/14;C12P17/08;C12R1/645 |
| 代理公司： | 重慶聚為捷知識產權代理事務所(普通合伙) 50297 | 代理人： | 李闖 |
| 地址： | 400038 重*** | 國省代碼： | 重慶;50 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一株產 布雷 菌素 毛黃堇內生 真菌 及其 應用 | ||
1.一株產布雷菲德菌素A的毛黃堇內生真菌，其特征在于，其命名為
2.權利要求1所述的毛黃堇內生真菌的應用，其特征在于，利用所述的毛黃堇內生真菌制備布雷菲德菌素A（BFA）。
3.制備布雷菲德菌素A（BFA）的方法，其特征在于，所述方法包括下列步驟：
1）取一定量的權利要求1所述的毛黃堇內生真菌菌種，在無菌條件下，用接種針挑取少量菌絲，接入已滅菌的固體PDA培養基試管，活化培養7天；
2）取活化培養后的菌種，在無菌條件下，轉接入已滅菌的液體培PDA種子培養基中，培養5天，得種子；
3）配制好的大米培養基121℃滅菌處理30?分鐘，冷卻備用。無菌條件下，按照50?ml/瓶的接種量接種入種子液，并用鑷子攪拌大米培養基使種子液與其充分混勻，室溫放置培養40天；
4）將上述培養物每瓶加入300?ml乙酸乙酯超聲提取1小時，重復3次，合并濃縮乙酸乙酯提取液得乙酸乙酯粗提物；
5）將上述粗提物采用中壓制備正相硅膠柱色譜法分離，先后使用一定體積比的石油醚/乙酸乙酯溶劑系統和一定體積比的乙酸乙酯/甲醇溶劑系統進行洗脫，收集5:1和3:1乙酸乙酯/甲醇溶劑洗脫液濃縮，丙酮溶解過夜即得95-99%的BFA晶體。
4.根據權利要求3所述的毛黃堇內生真菌制備布雷菲德菌素A（BFA）的方法，其特征在于，所述方法的步驟1中于26±1℃活化培養7天。
5.根據權利要求3所述的毛黃堇內生真菌制備布雷菲德菌素A（BFA）的方法，其特征在于，所述方法的步驟2中26±1℃下180?rpm搖床培養5天。
6.根據權利要求3所述的毛黃堇內生真菌制備布雷菲德菌素A（BFA）的方法，其特征在于，所述方法的步驟3中大米培養基包括500?ml?三角燒瓶中含大米150?g，蛋白胨1.5?g，自來水150?ml。
7.根據權利要求3所述的毛黃堇內生真菌制備布雷菲德菌素A（BFA）的方法，其特征在于，所述方法的步驟5中石油醚/乙酸乙酯溶劑系統的體積比為10:1、5:1、3:1、1:1、1:3或1:5。
8.根據權利要求3所述的毛黃堇內生真菌制備布雷菲德菌素A（BFA）的方法，其特征在于，所述方法的步驟5中乙酸乙酯/甲醇溶劑系統的體積比為5:1、3:1、1:1或1:3。
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