[發明專利]一種基于銅離子響應焦磷酸根的堿性磷酸酶或甲胎蛋白檢測方法

有效

• 申請號: 202210076454.1
• 申請日: 2022-01-24
• 公開（公告）號: CN114441758B
• 公開（公告）日: 2023-09-15
• 發明（設計）人: 于麗;臺文君;宓靜如;吳達;劉金鵬
• 申請（專利權）人: 山東大學
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/58;C12Q1/42
• 代理公司: 濟南金迪知識產權代理有限公司 37219
• 代理人: 陳桂玲

1.一種基于銅離子響應焦磷酸根的以非診斷目的檢測堿性磷酸酶或甲胎蛋白的檢測方法，包括步驟如下：

（1）向海藻酸鹽溶液中添加銅離子溶液，混合均勻，得到海藻酸銅水凝膠；將焦磷酸鈉溶于HEPES緩沖溶液中，得到焦磷酸鈉溶液；

所述海藻酸鹽為海藻酸鈉，濃度為0.2?wt%；所述銅離子溶液為硫酸銅溶液，濃度為2mM，海藻酸鹽溶液和銅離子溶液的體積比為1:1；所述焦磷酸鈉溶液中焦磷酸根的濃度為1.5mM；

（2）將堿性磷酸酶標準品溶解于HEPES緩沖液中，得到梯度濃度的堿性磷酸酶標準溶液；將甲胎蛋白母液用PBS緩沖溶液稀釋，得到梯度濃度的甲胎蛋白標準溶液；

（3）向步驟（2）制備的堿性磷酸酶標準溶液中添加焦磷酸鈉溶液，混合均勻后在35~40℃下孵育50~70min，繼續添加海藻酸銅水凝膠，然后將堿性磷酸酶混合物滴到pH試紙條的一端，爬行2~5min，測量堿性磷酸酶混合物在pH試紙條上的移動距離，繪制堿性磷酸酶標準曲線；所述堿性磷酸酶混合物的滴加量為30~40μL；

（4）向涂有包被抗體的微孔板中加入甲胎蛋白標準溶液，用封板膜蓋上，振蕩混勻，在35~40℃下孵育40~50?min后，用洗滌液洗滌3次，拍干；加入生物素標記的檢測抗體，在37℃下孵育30?min，用洗滌液洗滌3次，拍干；加入堿性磷酸酶標記的鏈霉親和素，反應20~40min，用洗滌液洗滌3次，拍干；繼續加入焦磷酸鈉溶液，在35~40℃下孵育50~70?min；然后將孵育液添加至海藻酸銅水凝膠中，混合均勻，然后將甲胎蛋白混合物滴到pH試紙條的一端，爬行2~5min，測量甲胎蛋白混合物在pH試紙條上的移動距離，繪制甲胎蛋白標準曲線；所述堿性磷酸酶標記的鏈霉親和素的濃度為1?μg/mL，所述檢測抗體、焦磷酸鈉溶液、堿性磷酸酶標記的鏈霉親和素和海藻酸銅水凝膠的體積比為1:1:1:1；

（5）將含堿性磷酸酶的待測樣品溶解于HEPES緩沖溶液中，得到待測樣品溶液，按照步驟（3）的方法測定待測樣品混合物在pH試紙條上的移動距離，對照堿性磷酸酶標準曲線，得到待測樣品中堿性磷酸酶的含量；將含甲胎蛋白的待測樣品溶解于PBS緩沖溶液中，得到待測樣品溶液，按照步驟（4）的方法測定待測樣品混合物在pH試紙條上的移動距離，對照甲胎蛋白標準曲線，得到待測樣品中甲胎蛋白的含量。

2.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟（3）中，所述堿性磷酸酶標準溶液和焦磷酸鈉溶液的體積比為1:1；所述堿性磷酸酶標準溶液和海藻酸銅水凝膠的體積比為1:1。

3.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟（3）中，在pH試紙條上爬行時間為3min。

4.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟（3）和步驟（4）中，所述pH試紙條為廣范試紙條，尺寸為4?mm×60?mm。

5.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟（4）中，所述微孔板為96孔板，包被抗體為甲胎蛋白捕獲抗體，檢測抗體為生物素標記的甲胎蛋白檢測抗體。

6.權利要求1所述基于銅離子響應焦磷酸根的以非診斷目的檢測堿性磷酸酶或甲胎蛋白的檢測方法在檢測血清中堿性磷酸酶或甲胎蛋白中應用。