[發(fā)明專利]非洲綠猴腎細(xì)胞的全懸浮細(xì)胞株及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210075921.9
• 申請(qǐng)日: 2022-01-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114317414B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-08-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 韓偉;黃書林;周建民;潘京學(xué)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中牧實(shí)業(yè)股份有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/071
• 分類號(hào): C12N5/071;C12N5/02;C12N7/00;C12N7/02;A61K39/12;A61P31/14;C12R1/91
• 代理公司: 北京惟誠(chéng)致遠(yuǎn)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11536
• 代理人: 王慧鳳

1.一種制備豬乙型腦炎滅活疫苗組合物的方法，包括：

采用非洲綠猴腎細(xì)胞的全懸浮細(xì)胞株生產(chǎn)豬乙型腦炎病毒；

收獲所述豬乙型腦炎病毒液，添加硫酸魚精蛋白，經(jīng)離心、過(guò)濾、濃縮、分子篩凝膠層析，得到豬乙型腦炎病毒抗原，制備豬乙型腦炎病毒滅活抗原后將其與動(dòng)物疫苗油佐劑或動(dòng)物疫苗水性佐劑混合，獲得豬乙型腦炎滅活疫苗組合物；

所述非洲綠猴腎細(xì)胞的全懸浮細(xì)胞株已于2021年10月26日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為CGMCC?No.23098；

所述動(dòng)物疫苗油佐劑由如下重量百分含量的組分組成：

注射用礦物油MARCOL?52??????????????????85%

木糖醇月桂酸單酯???????????????????????2.5%

三聚甘油三油酸酯???????????????????????10%

烷基糖苷APG0816????????????????????????1.25?%

正癸醇?????????????????????????????????1.25?%；

所述動(dòng)物疫苗水性佐劑由如下重量百分含量的組分組成：

注射用水溶液???????????????????????????88%；

聚合物組合：

甘露聚糖???????????????????????????????3%；

聚乙烯吡咯烷酮K90??????????????????????3%

羥甲基纖維素???????????????????????????1%

聚乳酸-羥乙酸PLGA??????????????????????1%

泊洛沙姆F188???????????????????????????1%

助劑：

油酸???????????????????????????????????3%。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述非洲綠猴腎細(xì)胞的全懸浮細(xì)胞株在V-SFM培養(yǎng)基上進(jìn)行復(fù)蘇和擴(kuò)大培養(yǎng)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述硫酸魚精蛋白的終濃度1-2mg/ml。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述豬乙型腦炎病毒為豬乙型腦炎病毒SA14-14-2。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在采用所述非洲綠猴腎細(xì)胞的全懸浮細(xì)胞株生產(chǎn)豬乙型腦炎病毒中，病毒接種后孵育階段的生物反應(yīng)器的參數(shù)為：溫度36～37℃，pH值7.2±0.1，溶氧40～60％，攪拌速度40～80rpm，通氣量0.1～0.5SPLM。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在采用所述非洲綠猴腎細(xì)胞的全懸浮細(xì)胞株生產(chǎn)豬乙型腦炎病毒中，病毒孵育后的培養(yǎng)階段的生物反應(yīng)器的參數(shù)為：溫度33～35℃，pH值7.4～7.8，溶氧40～60％，攪拌速度80～120rpm，通氣量0.1～0.5SPLM。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，非洲綠猴腎細(xì)胞的全懸浮細(xì)胞株的擴(kuò)大培養(yǎng)階段的生物反應(yīng)器培養(yǎng)的參數(shù)為：溶氧20～60％，pH?7.0～7.4，攪拌轉(zhuǎn)速80～120rpm/min，通氣量0.1～0.5SPLM，溫度35-37℃。

8.非洲綠猴腎細(xì)胞的全懸浮細(xì)胞株在生產(chǎn)豬乙型腦炎滅活疫苗組合物中的應(yīng)用，其特征在于：制備豬乙型腦炎病毒滅活抗原后將其與動(dòng)物疫苗油佐劑或動(dòng)物疫苗水性佐劑混合，獲得豬乙型腦炎滅活疫苗組合物；

所述非洲綠猴腎細(xì)胞的全懸浮細(xì)胞株已于2021年10月26日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為CGMCCNo.23098；

所述動(dòng)物疫苗油佐劑由如下重量百分含量的組分組成：

注射用礦物油MARCOL?52?????????????????85%

木糖醇月桂酸單酯??????????????????????2.5%

三聚甘油三油酸酯??????????????????????10%

烷基糖苷APG0816???????????????????????1.25?%

正癸醇????????????????????????????????1.25?%；

所述動(dòng)物疫苗水性佐劑由如下重量百分含量的組分組成：

注射用水溶液??????????????????????????88%；

聚合物組合：

甘露聚糖??????????????????????????????3%；

聚乙烯吡咯烷酮K90?????????????????????3%

羥甲基纖維素??????????????????????????1%

聚乳酸-羥乙酸PLGA?????????????????????1%

泊洛沙姆F188??????????????????????????1%

助劑：

油酸??????????????????????????????????3%。