[發明專利]一種用于提高卷枝毛霉WJ11產γ-亞麻酸產量的方法

在審

• 申請號: 202210073727.7
• 申請日: 2022-01-21
• 公開（公告）號: CN114410482A
• 公開（公告）日: 2022-04-29
• 發明（設計）人: 張懷淵;周長春;宋元達;房華;黃敬尊;張旭;左權
• 申請（專利權）人: 山東和眾康源生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N3/00;C12P7/6427;C12R1/785
• 代理公司: 淄博川誠知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 37275
• 代理人: 劉子成

1.一種用于提高卷枝毛霉WJ11產γ-亞麻酸產量的方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟1、菌種分離篩選

選用的菌種為卷枝毛霉WJ11；

步驟2、制備PDA斜面培養基；

步驟3、制備搖瓶基

將麩皮加水1000ml煮沸10分鐘，然后過濾，再定容1000ml，接著加入葡萄糖、酒石酸銨、酵母粉、氯化鈣、硫酸鎂和磷酸二氫鉀；將做好的PDA斜面培養基接種到搖瓶中；

步驟4、制備液體培養基

將麥芽糊精、蛋白胨、葡萄糖、麩皮、消泡劑和水均勻混合，然后在121℃條件下滅菌處理40分鐘；然后冷卻至35℃，并接入到搖瓶基中，接種量為1.2L/1000L；然后在29℃-31℃條件下，培養24小時；

步驟5、固體原料發酵

將麩皮、葡萄糖、硫酸銨和酵母膏混合均勻，然后在121℃條件下，蒸煮50分鐘；然后冷卻至35℃，然后和卷枝毛霉WJ11接種到液體培養基中，接種時流速要慢，并且滅菌罐須旋轉，菌種拌勻后，料的初始水含量約在55％-60％；然后進行裝盤，裝盤厚度為3cm，裝盤完成后室溫調節30℃，進行培養，室溫升高超過35℃時并有失水時開始通過噴淋無菌涼水降溫及補水，持續培養120小時；

步驟6、孢子分離

采用風分離裝置進行物理分離，得到發酵孢子，并全部通過100目篩過濾。

2.根據權利要求1所述的一種用于提高卷枝毛霉WJ11產γ-亞麻酸產量的方法，其特征在于：所述PDA斜面培養基按重量份包括以下組份：去皮土豆200g、葡萄糖20g、瓊脂20g、水1000mL。

3.根據權利要求2所述的一種用于提高卷枝毛霉WJ11產γ-亞麻酸產量的方法，其特征在于：所述PDA斜面培養基的制備方法包括以下步驟：

(1)、稱量和熬煮

按重量份分別稱取去皮土豆、葡萄糖和瓊脂，將去皮土豆切成小塊放入鍋中，加水1000ml，在加熱器上加熱至沸騰，維持20-30min，然后用2層紗布趁熱在量杯上過濾，濾渣棄取，再濾液補充水分到1000ml；

(2)、加熱溶解

把濾液放入鍋中，加入葡萄糖和瓊脂，待瓊脂完全溶解后，再定容1000ml；

(3)、分裝

將配制的培養基分裝入試管內，分裝時用三角漏斗以免使培養基沾在管口上造成污染；

(4)、加棉塞

培養基分裝完畢后，在試管口塞上棉塞，以阻止外界微生物進入培養基內造成污染，并保證有良好的通氣性能；

(5)、包扎

加塞后，將全部試管用麻繩或橡皮筋捆好，再在棉塞外包一層牛皮紙，以防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞，其外再用一道線繩或橡皮筋扎好，用記號筆注明培養基名稱、組別、配制日期。

4.根據權利要求1所述的一種用于提高卷枝毛霉WJ11產γ-亞麻酸產量的方法，其特征在于：所述搖瓶基按重量包括以下組份：麩皮20g、葡萄糖10g、酒石酸銨3.3g，酵母粉1.5g，氯化鈣0.1g，硫酸鎂2g，磷酸二氫鉀1.5g。

5.根據權利要求1所述的一種用于提高卷枝毛霉WJ11產γ-亞麻酸產量的方法，其特征在于：所述液體種子培養基按質量百分比包括以下組份：麥芽糊精5.6％，蛋白胨1.0％，葡萄糖3.0％，麩皮2％，消泡劑0.1％，余量為水。

6.根據權利要求1所述的一種用于提高卷枝毛霉WJ11產γ-亞麻酸產量的方法，其特征在于：所述固體原料按重量份包括以下組份：麩皮500kg，葡萄糖20kg，硫酸銨5kg，酵母膏5kg。