[發明專利]一種促乳酸菌生長發酵的肽-鋅配合物的制備方法及應用

在審

• 申請號: 202210073539.4
• 申請日: 2022-01-21
• 公開（公告）號: CN114395602A
• 公開（公告）日: 2022-04-26
• 發明（設計）人: 曾慶祝;謝翠娜
• 申請（專利權）人: 廣州大學
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/34;C12N1/20;C12N1/38;C12R1/225
• 代理公司: 廣州高炬知識產權代理有限公司 44376
• 代理人: 孫明科

本發明公開了一種促乳酸菌生長發酵的肽?鋅配合物的制備方法，包括以下步驟：步驟1、水解：將大豆分離蛋白使用蛋白酶進行水解，得到水解后的蛋白；步驟2、超濾：將水解后的蛋白進行超濾分離處理，得到小分子大豆肽；步驟3、純化：將小分子大豆肽采用大孔吸附樹脂進行吸附和洗脫，得到疏水性的肽；步驟4、反應：將疏水性的肽與硫酸鋅溶液在進行反應，得到疏水肽?鋅配合物。本發明促德氏乳桿菌保加利亞亞種的生長和發酵的特性肽?鋅配合物的制備方法，通過大孔吸附樹脂進行純化得到多肽，得到促乳酸菌生長最強的肽?鋅配合物，推進肽?鋅配合物替代無機鋅在乳酸菌生和發酵中的作用，實現肽?鋅配合物在乳酸菌生長發酵過程中的促生長作用。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種促乳酸菌生長發酵的肽-鋅配合物的制備方法及應用。

背景技術

德氏乳桿菌保加利亞乳桿菌是發酵的主要菌株之一，通過細胞代謝能將乳糖轉化為乳酸等有機酸，生成具有風味物質的乳酸飲品。提升乳酸菌的生長和代謝能力對工業生產具有重要意義。乳酸菌生長過程中必須營養物質含有碳源、氮源、水、微量元素等。目前已證明小分子肽是更有效氮源，利用乳酸菌的吸收以提高乳酸菌增殖和發酵性。鋅是生物體必須的微量元素，是生物體多種酶的激活劑，對調控動植物生命活動具有重要意義。研究表明乳酸菌能夠富集無機鋅，形成更有利于人體吸收的有機鋅，且一定量的鋅可以提高乳酸菌的活性和增殖量。肽-鋅相對無機鋅具有更高的生物利用率，低毒性和抗氧化性等特點，因此以肽-鋅配合物為營養物質添加在微生物培養基中，以提高乳酸菌的生長和代謝，對提高發酵工業具有重要的意義。

以肽-鋅配合物為有機鋅的制備研究已經比較成熟，多肽鋅相對于無機鋅，具有更高的生物活性，如抗氧化性，提高小鼠體內的抗氧化活性，更高的生物利用率等特點。乳酸菌不能分解大分子的蛋白質，需要通過分泌胞外蛋白酶，將大分子的蛋白質分解為小分子的多肽進而吸收到體內用于生長代謝，這樣就導致乳酸菌的生長及其酶活性不足，使得乳酸菌的降糖和產酸能力下降。

發明內容

針對現有技術中存在的問題，本發明的目的是提供一種促乳酸菌生長發酵的肽-鋅配合物的制備方法及應用。

本發明的目的采用以下技術方案來實現：

第一方面，本發明提供一種促乳酸菌生長與發酵的肽-鋅配合物的制備方法，包括以下步驟：

步驟1、水解：將大豆分離蛋白使用蛋白酶進行水解，得到水解后的蛋白；

步驟2、超濾：將水解后的蛋白進行超濾分離處理，得到小分子大豆肽；

步驟3、純化：將小分子大豆肽采用大孔吸附樹脂進行吸附和洗脫，得到疏水性的肽；

步驟4、反應：將疏水性的肽與硫酸鋅溶液在進行反應，得到疏水肽-鋅配合物。

優選地，所述步驟1中，水解過程是先將大豆分離蛋白與蒸餾水混合，再加入蛋白酶進行酶解，之后經過沸水浴與離心處理，得到澄清的多肽溶液。

優選地，所述大豆分離蛋白與所述蒸餾水的混合質量比為1：10。

優選地，所述蛋白酶的加入量為所述大豆分離蛋白質量的2％。

優選地，所述水解的反應溫度為55℃，pH為8.0，酶解時間為3h。

優選地，所述沸水浴的時間為10min，離心處理的轉速為8000rpm，離心處理的時間為10min。

優選地，所述步驟2中，超濾是采用5000Da的超濾膜進行超濾。

優選地，所述步驟2中，超濾結束后進行冷凍干燥。

優選地，所述步驟3中，先將小分子大豆肽按照10mg/mL的濃度進行溶解，之后再采用大孔吸附樹脂進行吸附。