[發(fā)明專利]一株來(lái)源于溶藻弧菌噬菌體的裂解酶及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210070046.5
• 申請(qǐng)日: 2022-01-20
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114426980A
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-05-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙哲;李席席;喻飛;張策;史燕;魏富成;吳穎
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河海大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/70
• 分類號(hào): C12N15/70;C12N1/21;C12N15/56;C12N15/55;A01N63/50;A01P1/00;C12R1/19
• 代理公司: 南京蘇高專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32204
• 代理人: 王艷

1.噬菌體的裂解酶基因holA和lysin的共表達(dá)載體，其特征在于，所述共表達(dá)載體通過(guò)將噬菌體基因組DNA作為模板，分別以基因holA的引物對(duì)和基因lysin的引物對(duì)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到基因holA片段和基因lysin片段，將基因holA片段和基因lysin片段融合，然后與載體連接即得。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的噬菌體的裂解酶基因holA和lysin的共表達(dá)載體，其特征在于，所述噬菌體為噬菌體HH109，所述載體為pET32a或pMMB207。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的噬菌體的裂解酶基因holA和lysin的共表達(dá)載體，其特征在于，所述基因holA的引物對(duì)包括上游引物holA-F1和下游引物holA-R1；或上游引物holA-F2和下游引物holA-R2；其中，所述上游引物holA-F1序列如SEQ ID NO：1所示，所述下游引物holA-R1序列如SEQ ID NO：2所示，所述上游引物holA-F2序列如SEQ ID NO：5所示，所述下游引物holA-R2序列如SEQ ID NO：6所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的噬菌體的裂解酶基因holA和lysin的共表達(dá)載體，其特征在于，所述基因lysin的引物對(duì)包括上游引物lysin-F1和下游引物lysin-R1；或上游引物lysin-F2和下游引物lysin-R2，其中，所述上游引物lysin-F1序列如SEQ ID NO：3所示，所述下游引物lysin-R1序列如SEQ ID NO：4所示，所述上游引物lysin-F2序列如SEQ ID NO：7所示，所述下游引物lysin-R2序列如SEQ ID NO：8所示。

5.含有權(quán)利要求1~4任一項(xiàng)所述的共表達(dá)載體的重組菌株。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的重組菌株，其特征在于，所述重組菌株為大腸桿菌BL21、溶藻弧菌菌株E110和不敏感溶藻弧菌E601或HN198菌株中的一種。

7.噬菌體共表達(dá)裂解酶holA-lysin，其特征在于，所述噬菌體裂解酶holA-lysin是將權(quán)利要求5或6所述的重組菌株進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)后得到。

8.權(quán)利要求7所述的噬菌體共表達(dá)裂解酶holA-lysin的制備方法，其特征在于，包括以下制備步驟：將權(quán)利要求5或6所述的重組菌株進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)后得到。

9.權(quán)利要求1~4任一項(xiàng)所述的共表達(dá)載體、權(quán)利要求5或6所述的重組菌株、權(quán)利要求7所述的噬菌體共表達(dá)裂解酶holA-lysin在細(xì)菌裂解中的應(yīng)用。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，所述細(xì)菌為大腸桿菌或溶藻弧菌。