[發明專利]一種綠僵菌產孢的固體發酵培養方法

在審

• 申請號: 202210068220.2
• 申請日: 2022-01-20
• 公開（公告）號: CN114438010A
• 公開（公告）日: 2022-05-06
• 發明（設計）人: 程東美;何俊烺;梁超鵬;張志祥
• 申請（專利權）人: 仲愷農業工程學院
• 主分類號: C12N3/00
• 分類號: C12N3/00;C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 廣州市時代知識產權代理事務所(普通合伙) 44438
• 代理人: 梁美玲

本發明涉及微生物技術領域，具體涉及一種綠僵菌產孢的固體發酵培養方法，該方法包括以下步驟，S1、將綠僵菌菌種接種到第一固體培養基中進行活化，得到活化的綠僵菌；S2、挑取活化后的綠僵菌孢子或菌苔接種到液體培養基進行液體發酵培養，得到綠僵菌液體發酵產物；S3、將綠僵菌液體發酵產物置于由豆渣和谷殼組成的第二固體培養基中以袋料法進行固體發酵，培養的溫度為24℃～26℃，培養的濕度為80％～90％，每培養3d后通入空氣，共培養為3d～10d直至內外長出綠色孢子，得到綠僵菌粗品，該固體培養方法能較好地運用豆渣來生產綠僵菌，具有收率高和生產成本低的優點。

技術領域

本發明涉及微生物技術領域，具體涉及一種綠僵菌產孢的固體發酵培養方法。

背景技術

目前害蟲防治仍以化學農藥為主，但其大量使用會對生態環境造成嚴重的破壞，害蟲抗藥性上升、農藥殘留等一系列的問題的產生。利用蟲生真菌防治害蟲是生物防治重要手段之一，具有易流行，對環境友好等特點，其中綠僵菌是一種廣泛分布的昆蟲病原真菌，可感染多種鱗翅目同翅目、鱗翅目、雙翅目、鞘翅目害蟲，是重要的昆蟲病原真菌之一，綠僵菌制劑具有無殘毒，無公害，使用安全等特點，對害蟲天敵亦有保護作用，可代替大量化學農藥的使用，具有廣闊的應用前景。

為滿足田間應用需求，需大量生產綠僵菌。目前大規模生產綠僵菌分生孢子的固體基質主要有麥麩、大米、米糠等農產品及農副產品，而麥麩、大米、米糠等是具有較大價值和價格較高的農產品，用于生產綠僵菌將會提高生產成本。因此，亟需開發一種能降低綠僵菌生產成本的途徑。我國是豆渣的產出大國，濕豆渣每年的產出量在2000萬噸以上，但由于濕豆渣易變質不易保存且存在口感粗糙等問題，使得豆渣利用率極低，大部分被直接丟棄，這不僅造成資源浪費而且給環境治理帶來巨大壓力。

發明內容

本發明的目的在于避免現有技術中的不足之處而提供一種綠僵菌產孢的固體發酵培養方法，該固體培養方法能較好地運用豆渣來大量生產綠僵菌，具有收率高和生產成本低的優點。

為實現上述目的，本發明提供以下技術方案：

提供一種綠僵菌產孢的固體發酵培養方法，包括以下步驟，

S1、將綠僵菌菌種接種到第一固體培養基中進行活化，得到活化的綠僵菌，其中，所述第一固體培養基包括麥芽糖、酵母提取粉、蛋白胨、黃粉蟲蛻、瓊脂和水；

S2、挑取活化后的綠僵菌孢子或菌苔接種到液體培養基進行液體發酵培養，得到綠僵菌液體發酵產物，其中，所述液體發酵培養包括麥芽糖、酵母提取粉、蛋白胨和水組成；

S3、將綠僵菌液體發酵產物置于由豆渣和谷殼組成的第二固體培養基中進行固體發酵，培養的溫度為24℃～26℃，培養的濕度為80％～90％，每培養3d后通入空氣，共培養為3d～10d直至內外長出綠色孢子，得到綠僵菌粗品。

在一些實施方式中，所述第一固體培養基的組分重量配比是：麥芽糖10g～40g、酵母提取粉5g～10g、蛋白胨0g～5g、黃粉蟲蛻0g～5g、瓊脂：15g～20g、水1L。

在一些實施方式中，所述液體培養基的組分重量配比是：麥芽糖10g～40g、酵母提取粉5g～10g、蛋白胨5g～10g、水1L。

在一些實施方式中，所述第二固體培養基的組分重量份是：豆渣50份～90份，谷殼10份～50份。

在一些實施方式中，所述第二固體培養基的厚度是1cm～5cm。

在一些實施方式中，所述第二固體培養基還添加有補充料，每100g第二固體培基需加入乳糖1g～10g、酵母提取粉0.5g～4g、花生油1mL～2mL和1mL～20mL水。

在一些實施方式中，所述S3中，綠僵菌液體發酵產物接種到液體培養基中的接種量為10％～20％。